關(guān)鍵詞：Tomlinson I + J；人造文庫(kù)；SCFV；噬菌體展示技術(shù)

Greg Winter'的實(shí)驗(yàn)室在MRC分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和MRC蛋白質(zhì)工程中心（英國(guó)劍橋）構(gòu)建了多種人造抗體文庫(kù)，這些抗體文庫(kù)可通過(guò)噬菌體展示和篩選技術(shù)誘導(dǎo)結(jié)合幾乎所有的靶分子。目前這些噬菌體文庫(kù)已經(jīng)在很多分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室成功使用，可在大量不同的蛋白，多肽，小分子復(fù)合物中誘導(dǎo)出特異性抗體反應(yīng)物。

單鏈抗體（single—chain antibody fragment，scFv）由抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過(guò)15～20個(gè)氨基酸的短肽（linker）連接而成。 Fv分子，因抗體分子量較大，在體內(nèi)的穿透力差，不易進(jìn)入組織中發(fā)揮作用，而用基因工程手段構(gòu)建更小的具有結(jié)合抗原能力的抗體片段（Fv分子或單鏈蛋白），可避免這一限制。

此外，肽鏈連接物還可將藥物、毒素或放射性核素與單鏈抗體蛋白相融合，可用于臨床診斷（成像檢查）和治療。

Tomlinson I + J文庫(kù)，該文庫(kù)包含有一億個(gè)不同的重組單鏈抗體基因片段（SCFV片段包含一個(gè)單個(gè)多肽區(qū)域包含有VH和VL區(qū)域，由可變的甘氨酸絲氨酸區(qū)域鏈接），克隆到噬菌粒載體并轉(zhuǎn)化到TG1 E. coli 細(xì)胞。通過(guò)噬菌體展示技術(shù)獲得大量的特異性重組抗體，可用于各種傳統(tǒng)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。 噬菌體展示技術(shù)將表型和基因型一起，將識(shí)別相應(yīng)抗原和進(jìn)行再擴(kuò)增的能力結(jié)合起來(lái)，不經(jīng)過(guò)人體免疫，通過(guò)幾輪“吸附-洗脫-擴(kuò)增”的體外篩選富集過(guò)程，即可得到人源的基因工程抗體。

Tomlinson I + J文庫(kù)，源于單一的具有側(cè)鏈多異性的VH （V3-23/DP-47 and JH4b）和Vκ（O12/O2/DPK9 and Jκ1）框架 ，側(cè)鏈多樣性具有和已知結(jié)構(gòu)的抗原位點(diǎn)結(jié)合，在成熟的體系中具有很高的多樣性。由這個(gè)框架（VH: 1-3, Vκ: 2-1-1）來(lái)編碼的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)是目前人抗體技術(shù)體系中zui普通的。它在能夠形成抗原結(jié)合表面的前提下，重鏈的CDR3設(shè)計(jì)的盡可能短。該文庫(kù)以噬菌粒/SCFV的形式，經(jīng)過(guò)與蛋白A和蛋白L的結(jié)合進(jìn)行篩選，在未知篩選的克隆序列的情況下進(jìn)行篩選和并具有成熟的免疫親和力。由于多樣性好，庫(kù)容量大，所以可篩選到較高的高親和力抗體。

Tomlinson I

構(gòu)建在plT2載體（（HIS myc 標(biāo)簽），多樣化的側(cè)鏈主要是來(lái)自于原始體系中多樣性的位點(diǎn)（一共18個(gè)殘基，H50, H52, H52a, H53, H55, H56, H58, H95, H96, H97, H98, L50, L53, L91, L92, L93, L94 and L96）此文庫(kù)經(jīng)過(guò)篩選后與突變的多樣性體細(xì)胞共同作用使其成熟。

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Percentage insert: 96%

Tomlinson J

和上述Tomlinson I描述相似，增添了NNK 側(cè)鏈。 

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英國(guó)Source Bioscience （Geneservice）與多個(gè)科研機(jī)構(gòu)（如NIH、NKI、Sanger等）建立合作關(guān)系，擁有zui大的cDNA、基因組、噬菌體展示、microRNA、siRNA、shRNA與MGC收藏庫(kù)，涉及物種包括人、小鼠、大鼠、牛，以及各種模式動(dòng)物如線蟲(chóng)、斑馬魚(yú)、果蠅、原雞、爪蟾等，產(chǎn)品達(dá)1600多萬(wàn)種。（Tomlinson I + J）是Source Bioscience提供的較為成熟的一個(gè)文庫(kù)，除此之外，還有優(yōu)于此文庫(kù)的DAb library，以及ATLAS scFV library。

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