任何熒光物質(zhì)都具有激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，發(fā)射波長(zhǎng)總是大于激發(fā)波長(zhǎng)。熒光激發(fā)光譜是通過測(cè)定熒光體的發(fā)光通量隨波長(zhǎng)變化而獲得的光譜，反映不同波長(zhǎng)激發(fā)光引起熒光的相對(duì)效率。熒光發(fā)射光譜是當(dāng)熒光物質(zhì)在固定的激發(fā)光源照射后所產(chǎn)生的分子熒光，是熒光強(qiáng)度對(duì)發(fā)射波長(zhǎng)的關(guān)系曲線，表示在所發(fā)射的熒光中各種波長(zhǎng)相對(duì)強(qiáng)度。由于各種不同的熒光物質(zhì)有它們各自特定的熒光發(fā)射波長(zhǎng)，可用它來鑒定熒光物質(zhì)。有些發(fā)熒光的物質(zhì)其熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比，故可用熒光分光光度法測(cè)定其含量。

　　分子熒光分光光度計(jì)對(duì)維生素含量的定性分析：

　　1.移取5ml維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液于25ml容量瓶中，用0.5mol/LHAc稀釋至刻度，搖勻，放入石英吸收池中。在700V電壓中，在450nm—600 nm范圍內(nèi)掃描標(biāo)準(zhǔn)溶液的發(fā)射光譜，通過譜圖的分析，確定其佳熒光發(fā)射峰波長(zhǎng)（522nm）。

　　2.設(shè)熒光發(fā)射峰為步驟1獲得的熒光發(fā)射峰波長(zhǎng)，在350nm—500 nm范圍內(nèi)掃描標(biāo)準(zhǔn)溶液的激發(fā)光譜，確定其佳熒光激發(fā)峰波長(zhǎng)（371nm）。

　　3.將上面獲得的激發(fā)波長(zhǎng)為激發(fā)波長(zhǎng)，掃描名物質(zhì)的熒光光譜，觀察所得到的光譜與上面得到光譜的異同。

　　分子熒光分光光度計(jì)對(duì)維生素含量的定量分析：

　　1.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：準(zhǔn)確取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液于5個(gè)25ml容量瓶中，用0.5mol/LHAc稀釋至刻度，搖勻，在激發(fā)波長(zhǎng)371nm，熒光波長(zhǎng)522nm處測(cè)定熒光強(qiáng)度，以濃度對(duì)熒光強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　2.維生素B2含量測(cè)定：取2.0ml維生素B2待測(cè)溶液于25ml容量瓶中，用0.5mol/LHAc稀釋至刻度，搖勻；在激發(fā)波長(zhǎng)371nm，熒光波長(zhǎng)522nm處測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算維生素B2含量。