培養(yǎng)基中的添加物、PH值、保存的問題

1、細胞培養(yǎng)用液：除培養(yǎng)基、血清、谷氨酰胺外，其他幾種液體也屬必須，不可省略：

（1）雙抗：200倍，（1ml/支）其終濃度為青霉素100U/ml；鏈霉素100ug/ml，-24度保存。  

（2）L-谷氨酰胺：100倍，（1ml/支）， 終濃度2mM，-24度保存。  

（3）丙酮酸鈉：配制濃度50mM，4ml/支，終濃度為1mM/ml， -24度保存。  

（4）Hepes液：配制濃度1M（5ml/支），一支Hepes加入到200ml  *培養(yǎng)基中，終濃度為25mM/ml，常溫保存。

2、液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應置-20度冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 度 冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的谷氨酰胺。

3、培養(yǎng)用液pH對細胞生長的影響

由于，大多數(shù)細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。

但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此，我們在配制培養(yǎng)用液時，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的PH還會向上浮動0.2左右。

4、液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

要冷藏，因為液體培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時，其溶液的PH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 1年。