免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的某些新進(jìn)展

免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的某些新進(jìn)展

免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在繼續(xù)改進(jìn)和完善中，新的技術(shù)方法不斷出現(xiàn)。除目前國內(nèi)已開始應(yīng)用的免疫金技術(shù)和免疫金銀技術(shù)外，80年代，新的免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)還有半抗原交聯(lián)抗體法和令人矚目的分子雜交免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。免疫金銀技術(shù)和分子雜交免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)將分別以專章　敘述，本節(jié)　僅就半抗原交聯(lián)抗體法作一簡要介紹。

　　【半抗原交聯(lián)抗體法（Hapten –Coupled techniques）】

　　近年來，為提高敏感性和減低非特異性染色，有些學(xué)者（Cammisuli 1976; Jassani 1981; Falini 1983） 在常規(guī)免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)上，發(fā)展了半抗原交聯(lián)抗體法，可作免疫熒光或免疫酶染色。本法的基本原理是應(yīng)用半抗原標(biāo)記*抗體。常用的半抗原有阿散酸，即對氨基苯砷酸（Arsanilic acid, ARS）,對氨基苯酰甘氨酸（P—aminobenzoyl glycine），亞對氨苯酰甘氨酸（N—P—aminobonozyl glutamic acid）和二硝基苯氨基丙睛亞胺酸脂（dinitrophenyl aminopropionitrile imido ester, DNP）。通過酰胺化反應(yīng)把半抗原結(jié)合到抗體分子上。在間接法（二步法）中，先以半抗原標(biāo)記的特異性抗體（*抗體）孵育切片，然后加入半抗原的標(biāo)記抗體，（標(biāo)記物可為熒光素或酶）（圖6-4）。在PAP染色（三步法）中，先用半抗原標(biāo)記的*抗體孵育切片，再加未標(biāo)記的抗半抗原特異性抗體作為橋抗體，第三步加半抗原交聯(lián)的PAP與之反應(yīng)，并作酶的呈色反應(yīng)（圖6-5）。*和第三抗體分別為半抗原標(biāo)記的特異性抗體和以半抗原標(biāo)記的抗酶抗體制備的含半抗原的PAP復(fù)合物。本法具有許多優(yōu)點，主要是：①敏感性高。由于本法是通過酰胺化反應(yīng)標(biāo)記半抗原，對抗體活性損失極小，抗體保留較高的活性，能結(jié)合較大量的半抗原，平均每個球蛋白分子可同時結(jié)合20個半抗原分子，每個半抗原又可用抗半抗原抗體相結(jié)合，特異免疫反應(yīng)明顯放大，其敏感性明顯高于常規(guī)的免疫酶和免疫熒光染色技術(shù)，特別有助于發(fā)現(xiàn)滴度低的同種抗血清和含抗原量較少的組織。②可用于雙重免疫染色。利用兩種交叉反應(yīng)的半抗原如阿散酸和對氨基苯酰甘氨酸分別標(biāo)記來自同一種動物的兩種特異性（*抗體）血清，應(yīng)用兩步法或三步法，即可在同一張切片內(nèi)同時顯示兩種不同的抗原。③由于特異性強、敏感性高，因此背景染色低。

圖6-4　半抗原標(biāo)記抗體酶技術(shù)—兩步法

圖6-5　半抗原標(biāo)記抗體酶技術(shù)—PAP法