免疫膠體金銀細(xì)胞化學(xué)染色的固定劑選擇

時(shí)間：2009-11-16閱讀：1306

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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
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免疫膠體金銀染色和其它免疫細(xì)胞化學(xué)方法一樣，要想得到好的染色效果，關(guān)鍵取決于標(biāo)本處理是否合適，只有使抗原性及組織結(jié)構(gòu)保存的好，才能使以后的染色成功成為可能，其次要用高特異性和價(jià)的一抗，選擇合適的稀釋度。由于免疫組化方法廣泛應(yīng)用于不同的生物學(xué)科，所要檢出的抗原種類繁多，性質(zhì)也各不相同。因此，不可能有一種適用于所有抗原的固定劑，而是根據(jù)不同的抗原性質(zhì)區(qū)別對(duì)待。根據(jù)我們使用的固定劑介紹如下，供參考。

　　一、固定劑的選擇及固定時(shí)間（詳見表5-9）

　?。?）Karovsky's 液pH7.3。

　?。?）PAP液（Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative）

　　配制見附錄一。

表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定時(shí)間

待檢抗原	固定劑的種類	固定時(shí)間
蛋白質(zhì)
酶	冰凍切片不固定，或用95%乙醇，B₅固定液	10 min
激素	冰凍切片，涂片，印片，不固定或丙酮，甲	10 min
激素	醇，乙醇，PEG固定，B₅固定液固定	4^℃30 min
免疫球蛋白	中性福爾馬林，四氯化碳（1%甲醛）	30 min
白蛋白	95%乙醇含1～5%冰醋酸	30 min
纖維蛋白元	同上	30 min
病毒	丙酮，100%乙醇，甲醇，乙醚	30 min
糖蛋白	PLP，丙酮	30 min
脂質(zhì)Forssman	中性福爾馬林	20 min
抗原	2.5%硫代硫酸鈉，冰凍切片不固定	20 min
免疫電鏡	PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛（Kacnovsky’s 液pH7.3）PEG、ECD-G等	30min

　　二、切片的處理與粘附。

　　免疫組化染色過程較長(zhǎng)，洗的次數(shù)很多，而且均在振蕩洗滌，抗原片附貼不緊，往往在zui后的時(shí)刻，還沒有等顯色就會(huì)脫落導(dǎo)致前功盡棄，這個(gè)環(huán)節(jié)　雖小卻會(huì)影響大局，因此，為了保證切片染色成功必須把切片處理好，解除掉片的后顧之憂

免疫膠體金銀細(xì)胞化學(xué)染色的固定劑選擇

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