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免疫組化步驟

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免疫組化步驟

1。4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中過夜。蠟塊制作。切片，貼片。0.01MKPBS清洗5min×3后；
2。加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%過氧化氫）30min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3；
3。加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml）30min，以增加細胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；
4。加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋疊氮納0.08g）稀釋的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗體，0.01MKPBS洗5min×3；
5。加入0.01MKPBS稀釋的的二抗，室溫孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3；
6。加入ABC復(fù)合物之類的抗體，室溫孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸餾水迅速沖三次；
7。加入顯色液，進行免疫組織化學(xué)顯色，時間一般不超過30min，可不時在顯微鏡下進行觀察，待細胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液，用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MKPBS終止反應(yīng)；
8。梯度酒精脫水之后，封片，拍照。

 

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