人P選擇素（P-selectin）elisa試劑盒

人P選擇素（P-selectin）elisa試劑盒

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        人人P 選擇素選擇素（P-Selectin/CD62P）酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析

        人人 選擇素選擇素                                   酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析

                         試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書

                         試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用

本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用

產(chǎn)品編號產(chǎn)品編號：：CSB-E04708h

產(chǎn)品編號產(chǎn)品編號：：

檢測范圍檢測范圍：：2.5 ng/ml - 160 ng/ml

檢測范圍檢測范圍：：

zui低檢測限zui低檢測限：：0.62 ng/ml

zui低檢測限zui低檢測限：：

特異性特異性：：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人P-Selectin/CD62P，且與其

特異性特異性：：

他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

有效期有效期：：6 個月

有效期有效期：：

預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：ELISA          法定量測定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中

預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：

P-Selectin/CD62P 含量。

說明說明

說明說明

1.  試劑盒保存：未開封的試劑盒應(yīng)儲存于2-8℃；開封后的酶標板應(yīng)與干燥

    劑一起儲存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲存條件下，產(chǎn)品在有

    效期內(nèi)可正常使用。

2.  濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3.  中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。

4.  剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實

    驗結(jié)果造成任何影響。

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實驗原理實驗原理

實驗原理實驗原理

     用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗P-Selectin/CD62P

抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗 P-Selectin/CD62P  抗

體、HRP 標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB 顯色。TMB 在過氧化

物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺

和樣品中的P-Selectin/CD62P 呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸

光度 （OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制

試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制

1.  酶聯(lián)板酶聯(lián)板（Assay plate ）：                                      一塊（96 孔）。

    酶聯(lián)板酶聯(lián)板

2.  標準品標準品（Standard）：                                          2 瓶（凍干品）。

    標準品標準品

3.  樣品稀釋液樣品稀釋液（Sample Diluent）：                                  1×20ml/瓶。

    樣品稀釋液樣品稀釋液

4.  生物素標記抗體稀釋液生物素標記抗體稀釋液（（Biotin-antibody Diluent）：）             1×10ml/瓶。

    生物素標記抗體稀釋液生物素標記抗體稀釋液（（                            ））

5.  辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（（HRP-avidin Diluent）） 1×10ml/瓶。

    辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（（                         ））

6.  生物素標記抗體生物素標記抗體（（Biotin-antibody）：）                 1×120μl/瓶（1：100）。

    生物素標記抗體生物素標記抗體（（                  ））

7.  辣根過氧化物酶標記親和素辣根過氧化物酶標記親和素（（HRP-avidin）：）            1×120μl/瓶（1：100）。

    辣根過氧化物酶標記親和素辣根過氧化物酶標記親和素（（                ））

8.  底物溶液底物溶液（（TMB Substrate）：）                                   1×10ml/瓶。

    底物溶液底物溶液（（                 ））

9.  濃洗滌液濃洗滌液（（Wash Buffer ）） 1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25 倍。

    濃洗滌液濃洗滌液（（               ））

10. 終止液終止液（（Stop Solution）：）                                     1×10ml/瓶。

    終止液終止液（（                ））

需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材

需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材

1.  標準規(guī)格酶標儀

2.  高速離心機

3.  電熱恒溫培養(yǎng)箱

4.  干凈的試管和Eppendof 管

5.  系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

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6.  蒸餾水，容量瓶等

標本的采集及保存標本的采集及保存

標本的采集及保存標本的采集及保存

1.  血清：全血標本請于室溫放置2 小時或4℃過夜后于1000g 離心20 分鐘，

    取上清即可立即檢測；或進行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但

    應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后檢測。

2.  血漿：可用EDTA 或肝素作為抗凝劑，標本采集后30 分鐘內(nèi)于2   -   8°C

    1000 g 離心15 分鐘，取上清即可立即檢測；或進行分裝，并將標本放于

    -20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后

    檢測。

3.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g 離心20 分鐘，取上清即可立即

    檢測；或進行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后檢測。

注：注：標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測，因此溶血標本不宜進行此項檢測。。

注注：：標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，，因此溶血標本不宜進行此項檢測因此溶血標本不宜進行此項檢測。。

標本的稀釋原則標本的稀釋原則：：

標本的稀釋原則標本的稀釋原則：：

首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。

只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中，應(yīng)

做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應(yīng)再乘以“N”。

標準品的稀釋原則標準品的稀釋原則：：2 瓶，使用前于6000-10000rpm 離心30 秒。每

標準品的稀釋原則標準品的稀釋原則：：

瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10 分鐘以上，然后反復(fù)顛倒

/搓動以助溶解，其濃度為160 ng/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋160 ng/ml,

80 ng/ml, 40 ng/ml, 20 ng/ml, 10 ng/ml, 5 ng/ml, 2.5 ng/ml，樣品稀釋液直接

作為標準濃度0   ng/ml，臨用前15 分鐘內(nèi)配制，用完丟棄，下次檢測使用新

鮮配置的標準品。

如配制80 ng/ml 標準品：取0.5ml  （不要少于0.5ml）160 ng/ml 的上述標準

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品加入含0.5ml 樣品稀釋液的Eppendorf 管中，混勻即可，其余濃度以此類

推。

生物素標記抗體的稀釋原則生物素標記抗體的稀釋原則：：

生物素標記抗體的稀釋原則生物素標記抗體的稀釋原則：：

打開瓶蓋前請離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀

釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制 （每孔100μl），實際

配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl 生物素標記抗體加990μl 生物素標記抗體

稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。

辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：：

辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：：

打開瓶蓋前請離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以辣根過氧化物酶標記親和

素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔

100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl 辣根過氧化物酶標記親和素

加990μl 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用

前一小時內(nèi)配制。

操作步驟操作步驟

操作步驟操作步驟

實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻

時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品

稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。加樣時，槍頭應(yīng)直接對

準液面，切勿沿孔壁加樣。

1.  血清，血漿樣本用樣本稀釋液進行1:30倍稀釋后進行檢測，具體操作如下：

    取10μl  樣本加入到290μl          的樣本稀釋液（1:30稀釋）中混勻，得到的即

    為1:30倍稀釋后的樣本。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，

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    余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于

    酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，

    37℃反應(yīng)120 分鐘。

    為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

3.  棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl （取1μl

    生物素標記抗體加99μl 生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，

    在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60 分鐘。

4.  溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分鐘，

    200μl/每孔，甩干。

5.  每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液 （同生物素標記抗體工作液）

    100μl，37℃，60 分鐘。

6.  溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，每次浸泡1-2 分鐘，

    200μl/每孔，甩干。

7.  依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色 （（30 分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標

                                               （（

    準品的前3-4 孔有明顯的梯度藍色，后3-4 孔顯色不明顯，即可終止）。

8.  依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加

    入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底

    物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

9.  用酶聯(lián)儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度 （OD 值）。 在加終止液

    后15 分鐘以內(nèi)進行檢測。

實驗備注實驗備注

實驗備注實驗備注

1.  用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到

    管底。

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2.  每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶

    液及終止液。測量時先用此孔調(diào)OD 值至零。

3.  為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上

    蓋或覆膜。

4.  未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體

    工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請

    勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液、或辣根過氧化物

    酶標記親和素工作液。

5.  建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。

洗板方法洗板方法

洗板方法洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上

鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml

注入孔內(nèi)，浸泡1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

 自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算計算

計算計算

請從我們的下載專業(yè)軟件"Curve Exert 1.3"，并根據(jù)提示制作標準曲線。

以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD 值為縱坐標（普通坐標），在半對

數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；

再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方

程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即

為樣品的實際濃度。

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注意事項注意事項

注意事項注意事項

1.  本操作說明適用于本操作說明適用于48T 試劑盒試劑盒，， 48T 試劑盒中酶聯(lián)板試劑盒中酶聯(lián)板、標準品、標準品、生物素、生物素

    本操作說明適用于本操作說明適用于        試劑盒試劑盒，，      試劑盒中酶聯(lián)板試劑盒中酶聯(lián)板、、標準品標準品、、生物素生物素

    標記抗體及辣根過氧化物酶標記親和素減半標記抗體及辣根過氧化物酶標記親和素減半。。

    標記抗體及辣根過氧化物酶標記親和素減半標記抗體及辣根過氧化物酶標記親和素減半。。

2.  當混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

3.  洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

4.  一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

5.  請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。

6.  如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋

    倍數(shù)。

7.  在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

8.  底物請避光保存。

9.  不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

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