抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）測定

抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）測定

    血管炎系指以血管壁（主要是動(dòng)脈）發(fā)炎和壞死為基本病理所引起的一組疾病。

    近年來認(rèn)識(shí)到抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophil cytoplasmic antibody，ANCA）是存在于血管炎患者血清中的自身抗體，是診斷血管炎的一種特異性指標(biāo)。采用間接免疫熒光法（1f了），可將ANCA分為胞漿型（C-ANCA）、核周型（P-ANCA）和不典型ANCA（X-ANCA）。

    C—ANCA的靶抗原是髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、彈性蛋白酶（elastase）、組織蛋白酶C（cathepsin G）、溶菌酶、乳肝褐素（1actoferrin），在所有ANCA陽性血清中約占40％。X-AN-CA或P-ANCA的靶抗原是乳肝褐素、溶菌酶、β葡萄糖苷酸酶（β-glucoronidase）、組織蛋白酶G。

    ANCA的檢測方法有許多種，包括IFF、RIA、ELISA、Western印跡法、斑點(diǎn)印跡法及免疫沉淀試驗(yàn)等。方法為IFF，至今仍作為ANCA篩檢的“金指標(biāo)”。在用IFF法檢測ACNA的同時(shí)進(jìn)行ELISA的檢測將有助于疾病的動(dòng)態(tài)觀察；靶抗原PR3或MPO的分辨將有助于某些特發(fā)性壞死性血管炎或壞死性腎小球腎炎的確診。Gross等（1993）作了ANCA和有關(guān)疾病的分析。陳素英等（1996）以IFF法檢測ANCA并對(duì)其與170例疾病的相關(guān)性作了報(bào)道?，F(xiàn)介紹IFF檢測ANCA。

    1．操作步驟

    （1）用肝素抗凝血分離白細(xì)胞，以0．01mol／L，pH7．4PBS液洗滌，制成細(xì)胞基質(zhì)片，用95％乙醇固定5min。

    （2）將1：20稀釋的血清標(biāo)本滴加于底物片上，濕盒內(nèi)37~C孵育30min。

    （3）再將基質(zhì)片分為三組，分別滴加1：10稀釋的FITC-羊抗人IgG、IgA和IgM，37~C孵育30min，洗滌3次。

    （4）加2：1緩沖甘油封片，置熒光顯微鏡下觀察。

    2．結(jié)果觀察  C-ANCA：熒光將胞漿勾劃出清晰分葉核輪廓；P-ANCA：熒光集中核周圍形成環(huán)狀，或不規(guī)則塊狀；X-ANCA：表現(xiàn)為彌漫的胞漿熒光。

    3．注意事項(xiàng)  由于乙醇固定的基質(zhì)片上抗核抗體（ANA）陽性血清易表現(xiàn)為P-ANCA假陽性，因此應(yīng)采用多聚甲醛固定以分辨是否ANA與ANCA共存。

    4．臨床意義  C-ANCA是診斷多發(fā)性肉芽腫（Weaner’s granulomatosis，WG）非常敏感的指標(biāo)，也少見于微小多動(dòng)脈炎（microscopic polyarteritis，MPA），Churg-Strauss綜合征、經(jīng)典的結(jié)節(jié)性多發(fā)性動(dòng)脈炎。P-ANCA見于腎性血管炎，急性進(jìn)行性腎小球腎炎（rapidly pro-Gressive lomemlonephritis，PRGN），風(fēng)濕性和膠原性血管疾病。X-ANCA或P-ANCA見于潰瘍性結(jié)腸炎，自身免疫性肝炎，原發(fā)性硬化膽管炎。

    陳素英等檢測的結(jié)果指出，ANCA在風(fēng)濕病患者血清中陽性率為70．0％，與ANA和抗組蛋白（histone）有交叉重疊現(xiàn)象。在風(fēng)濕病患者中，ANCA不僅存在于SLE中，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及皮肌炎患者的血清也可出現(xiàn)ANCA陽性。在腎臟疾病中，ANCA陽性率為72．85％，其分布較廣泛，多見于新月體腎小球腎炎、紫癜性腎炎、IsA腎病和局灶節(jié)段性腎小球硬化，但也可見于微小病變性腎病、急性間質(zhì)腎炎、腎小球終末期病變等疾病中。

因此，不能以ANCA陽性而確診為局限于腎臟MPA或壞死性腎小球腎炎，腎組織學(xué)檢查仍*。

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