抗心肌β1與M2受體自身抗體的檢測(cè)方法

抗心肌β1與M2受體自身抗體的檢測(cè)方法

    近年來，學(xué)者們相繼發(fā)現(xiàn)在擴(kuò)張型心肌病（DCM）患者血清中存在抗心肌pI與M2受體的自身抗體。張麟等（1998）以心肌pl與M2受體細(xì)胞外第二環(huán)表位肽段的合成肽作為抗原，用ELESA法檢測(cè)了中國人DCM血清中抗心肌p1與M2受體的自身抗體，并分析其臨床意義，現(xiàn)介紹如下。

    1．操作步驟  將心肌pI與M：兩種受體的氨基酸肽段溶解于100mmol／L的無水Na2C03溶液中（PH：11），配成濃度為5／／z／mL的抗原包被溶液。于微量酶標(biāo)板每孔加50bL進(jìn)行包被；4℃冰箱過夜，次日加50tze／mLPMT溶液封閉，37~C水浴1h，用PBS—T緩沖液洗板3次。將待檢血清從1：20-1：2560倍比稀釋，每孔分別加入血清50ul，4~C冰箱過夜，用PBS—T溶液洗孔三次。每孔加入50gLl：500親和純化的生物素標(biāo)記羊記人IzC（H+L）抗體，37℃水浴1h。用PBS—T溶液洗板3次，每孔加人50／tLl：500的鏈霉親合素一HRP結(jié)合物，37~C水浴1h，用PBS溶液洗孔3次。每孔加50~tL 2．5mmol／L H20：與2mmol／LABTS（溶于檸檬酸緩沖液，pH二5）的混合液，37~（2水浴30min后，用酶標(biāo)儀以405nm波長測(cè)光密度值（OD值）。

    2．判斷標(biāo)準(zhǔn)  以陽性血清與陰性血清的OD值之比即P／N≥2．1為陽性。以呈陽性的血清zui高稀釋度作為該標(biāo)本的抗體滴度。每一樣本均設(shè)雙孔同時(shí)測(cè)定。

    3．臨床意義  DCM患者不僅存在抗心肌p1與M：受體的自身抗體，而且抗體滴度也明顯高于正常對(duì)照組。因此，在DCM患者中檢測(cè)此類自身抗體對(duì)診斷和治療有一定的臨床意義，長期應(yīng)用b-受體阻滯劑可能對(duì)病情的轉(zhuǎn)歸有利。

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