甲狀腺過(guò)氧化物酶TPO的檢測(cè)方法

甲狀腺過(guò)氧化物酶TPO的檢測(cè)方法

    甲狀腺過(guò)氧化物酶（thyroidperoxidase，TPO）是甲狀腺微粒體（TM）的主要有效抗原活性成分，分子量為84～105kD，基因重組TPO為933個(gè)氨基酸的多肽鏈。鑒于以往使用的粗提TM抗原中混雜有其他抗原成分，在測(cè)定自身免疫性甲狀腺炎病人血清中抗-TM時(shí)，可能出現(xiàn)少數(shù)假陽(yáng)性，為使結(jié)果更為可靠，目前國(guó)外已將抗-TPO代替抗-TM抗體檢測(cè)，而且大多數(shù)文獻(xiàn)已將抗-TM抗體改名為抗-TPO抗體。我國(guó)徐榮桂等首先建立了純化TPO抗原和測(cè)定抗-TPO抗體的ELISA方法。其TPO抗原分析與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)告相似?？?/span>-TPO抗體的陽(yáng)性率在各組疾病中，與抗-TM抗體有一定相關(guān)性（r二0．731），且低于抗-TM陽(yáng)性率，與國(guó)外所得的結(jié)果也相近（r二0．584—0．835）。故介紹如下。

    1．TPO抗原的制備：取單純性甲狀腺腫手術(shù)切除物10g，冰凍后切成小塊，加40mL0．05mol／L，pH 7．0PBS（含200btmol／LKl）。用組織搗碎機(jī)10000r／min破碎2min，再用超聲細(xì)胞粉碎儀粉碎3rnin。其勻漿經(jīng)紗布過(guò)濾。1 000r／rain離心10min，上清用35 000Xg離心45min（4℃），沉淀物用上述PBS洗3次，將沉淀物再溶于2mLPBS中，然后加20mLl0％去氧膽酸鈉和20mL 0．14~／,胰酶，室溫作用1h，立即離心10 000 X g 20rain（4℃），過(guò)SephadexG-200凝膠柱，同上PBS洗脫。收集主峰蛋白，PBS透析后再用抗人全血清Sevharose4B親和層析柱吸收，—20cC保存?zhèn)溆谩?/span>

    2．操作步驟  用TPO抗原5Ug／mL（用0．1mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液稀釋）100gL包被聚苯乙烯反應(yīng)板微孔，4℃過(guò)夜；洗滌后，加1：10稀釋（用含10％小牛血清PBS）的病人血清100r&，同時(shí)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照孔，45℃1h；洗板后加100tzLl：10 000HRP-SPA，45℃，1h；洗板4次后，用OPD底物顯色10rain，以2mol／LU2S04終止反應(yīng)；在酶標(biāo)儀測(cè)492nm吸光度。陽(yáng)性：P／N值大于或等于2．1。

    3．臨床意義  甲亢和橋本甲狀腺炎患者血清抗-TIAO的陽(yáng)性率分別為42．2％和77．7％，與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道接近。且類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者陽(yáng)性率（3．1％）比國(guó)外的檢測(cè)結(jié)果低。目前國(guó)內(nèi)常用TGA及抗-TPO聯(lián)合檢測(cè)作為臨床診斷和鑒別診斷自身免疫性甲狀腺炎的重要依據(jù)。

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