使用CSA技術的技巧

使用CSA技術的技巧

    在使用CSA技術時，也應注意某些組織細胞內內源性過氧化物酶、內源性生物素的干擾。內源性過氧化物酶可用0.3％～3％H₂0₂抑制其活性。

    標記的雜交探針或抗體的非特異性結合，以及其他目標探針的非特異性結合放大，都可給實驗的分析帶來困難。因為CSA技術的顯著放大能力，對非特異性結合的信號也具有放大作用。

    但因為CSA具有*的敏感性，因此抗體和核酸探針可稀釋到相當高的濃度，在目標物達到飽和所需的濃度以下，這樣非特異性背景染色將大大降低或消失，而且稀釋度的提高還可節(jié)約昂貴試劑的用量。

    哺乳動物細胞和組織內含有生物素依賴的羧基酶，它是許多功能代謝必需的。當使用生物素鏈霉親和素檢測系統(tǒng)時，這些含有生物素的酶產生很強的背景信號。在使用時應預先封閉組織細胞內的內源性生物素。

    生物素化酪胺酰胺與HRP酶促反應后，加熱可改進CSA檢測敏感性。在孵育液中加入增加黏性的葡萄糖硫酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮（poly-vinyl pyrrolidone，PVP）可降低苯氧基原子團中間體的擴散，使信號定位更為準確。也有文獻報道證明在使用標記的酪胺酰胺時，直接用HRP標記探針對于降低非特異性結合尤其有用。

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