IL-3檢測(cè)的注意事項(xiàng)

IL-3檢測(cè)的注意事項(xiàng)

    1．ConA的影響  用ConA制備脾細(xì)胞培養(yǎng)上清時(shí)，關(guān)鍵是摸索*ConA劑量，一般以5—10ug／mL為zui宜。

    2．培養(yǎng)條件的影響  ①培養(yǎng)時(shí)間：ConA刺激后培養(yǎng)液的收獲時(shí)間視鏡下觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化情況而定，一般細(xì)胞開(kāi)始轉(zhuǎn)化即可收集培養(yǎng)上清；②細(xì)胞濃度：一般以5X10h～1X107／mL為宜；③小牛血清的不同批號(hào)對(duì)ID3產(chǎn)生影響很大，必須先經(jīng)過(guò)鑒定。

    3．用WEHI-3細(xì)胞誘生IL-3時(shí)，培養(yǎng)液中不加小牛血清，因?yàn)檠逯泻薪M胺酶，可干擾IL-3活性測(cè)定。

    4．用依賴(lài)株細(xì)胞檢測(cè)IL-3時(shí)，依賴(lài)株必須生長(zhǎng)狀態(tài)良好，一般細(xì)胞活性須大于95％，否則影響檢測(cè)結(jié)果。

    5．用骨髓干細(xì)胞增殖法測(cè)定ID3時(shí)，應(yīng)摸索*細(xì)胞濃度，一般為5X106／mL，*培養(yǎng)時(shí)間為60～72h，加核素后繼續(xù)培養(yǎng)4—8h收集細(xì)胞為宜。

    6．集落刺激法檢測(cè)IL-3時(shí)，瓊脂糖煮沸溶化后，應(yīng)使溫度維持在45~C左右，再加入37~C預(yù)溫的細(xì)胞懸液，這樣瓊脂糖不易凝固，細(xì)胞也不會(huì)被燙死亡；使用瓊脂糖較瓊脂為好；瓊脂凝膠要有一定的厚度，一般35mm小平皿加入lmL瓊脂糖—細(xì)胞混合液。

    7．集落刺激法測(cè)IL-3時(shí)，內(nèi)源性前列腺素E和IFN-a、p可能影響集落的數(shù)量和大小，可加用消炎痛（0.1ug/mL）和／或IFN中和血清以消除其影響。

    8．MTr法檢測(cè)IL-3時(shí)，需摸索細(xì)胞代謝MTr的zui適時(shí)間，以4h為宜。加入酸化異丙醇溶解甲臘顆粒時(shí)，培養(yǎng)液血清濃度一定不應(yīng)大于5％。

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