IL-3檢測的注意事項

IL-3檢測的注意事項

    1．ConA的影響  用ConA制備脾細胞培養(yǎng)上清時，關(guān)鍵是摸索*ConA劑量，一般以5—10ug／mL為zui宜。

    2．培養(yǎng)條件的影響  ①培養(yǎng)時間：ConA刺激后培養(yǎng)液的收獲時間視鏡下觀察細胞轉(zhuǎn)化情況而定，一般細胞開始轉(zhuǎn)化即可收集培養(yǎng)上清；②細胞濃度：一般以5X10h～1X107／mL為宜；③小牛血清的不同批號對ID3產(chǎn)生影響很大，必須先經(jīng)過鑒定。

    3．用WEHI-3細胞誘生IL-3時，培養(yǎng)液中不加小牛血清，因為血清中含有組胺酶，可干擾IL-3活性測定。

    4．用依賴株細胞檢測IL-3時，依賴株必須生長狀態(tài)良好，一般細胞活性須大于95％，否則影響檢測結(jié)果。

    5．用骨髓干細胞增殖法測定ID3時，應(yīng)摸索*細胞濃度，一般為5X106／mL，*培養(yǎng)時間為60～72h，加核素后繼續(xù)培養(yǎng)4—8h收集細胞為宜。

    6．集落刺激法檢測IL-3時，瓊脂糖煮沸溶化后，應(yīng)使溫度維持在45~C左右，再加入37~C預(yù)溫的細胞懸液，這樣瓊脂糖不易凝固，細胞也不會被燙死亡；使用瓊脂糖較瓊脂為好；瓊脂凝膠要有一定的厚度，一般35mm小平皿加入lmL瓊脂糖—細胞混合液。

    7．集落刺激法測IL-3時，內(nèi)源性前列腺素E和IFN-a、p可能影響集落的數(shù)量和大小，可加用消炎痛（0.1ug/mL）和／或IFN中和血清以消除其影響。

    8．MTr法檢測IL-3時，需摸索細胞代謝MTr的zui適時間，以4h為宜。加入酸化異丙醇溶解甲臘顆粒時，培養(yǎng)液血清濃度一定不應(yīng)大于5％。

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