用人血清進(jìn)行噬菌體ElISA

用人血清進(jìn)行噬菌體ElISA

[器材和試劑]

● 包被緩沖液

● PBST

● PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％ BSA（Sigma）]

● 兔抗人Fc—特異性IgG（Pierce）：用包 被緩沖液稀釋為5．0ug/ml①

● HRP標(biāo)記的抗噬菌體抗體（Amersham Biosciences）：用封閉液以1/10000比例 稀釋

● 顯色液[3，3’，5，5’—四甲基聯(lián)苯胺 （TMB）液體底物系統(tǒng)，Sigma]

[方法]

1．將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過夜。

2．用PBST洗滌多孔板。

3．加250ul PBBST。37℃孵育2小時(shí)。

4．棄去PBBST，將200ul噬菌體上清等量加入各孔。每孔中加入0．25ul血清，37℃振 蕩孵育60分鐘。

5，用PBST洗滌板孔。

6．加200gl HRP標(biāo)記的羊抗噬菌體抗體。37℃振蕩孵育30分鐘。

7．用PBST洗滌板孔。

8．每孔中加200ul顯色液。室溫避光孵育15分鐘。加25ul 2mol/L H2S04終止反應(yīng)。分 析前在酶標(biāo)儀中振蕩10秒。

9．用自動(dòng)酶標(biāo)儀將A₄₀₅和A₆₅₅間的差值作為結(jié)果記錄。

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