一,基本原理
利用紫外-可見吸收光譜來進(jìn)行定量分析由來已久,可追溯到古代,公元60年古希臘已經(jīng)知道利用五味子浸液來估計(jì)醋中鐵的含量,這一古老的方法由于zui初是運(yùn)用人眼來進(jìn)行檢測(cè),所以又稱比色法。到了16、17世紀(jì),相關(guān)分析理論開始蓬勃發(fā)展,1852年,比爾(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所發(fā)表的文章,提出了分光光度的基本定律,即液層厚度相等時(shí),顏色的強(qiáng)度與呈色溶液的濃度成比例,從而奠定了分光光度法的理論基礎(chǔ),這就是的朗伯-比爾定律。
1.紫外-可見吸收光譜的形成
吸光光度法也稱做分光光度法,但是分光光度法的概念有些含糊,分光光度是指儀器的功能,即儀器進(jìn)行分光并用光度法測(cè)定,這類儀器包括了分光光度計(jì)與原子吸收光譜儀(AAS)。吸光光度法的本質(zhì)是光的吸收,因此稱吸光光度法比較合理,當(dāng)然,稱分子吸光光度法是zui確切的。
紫外-可見吸收光譜是物質(zhì)中分子吸收200-800nm光譜區(qū)內(nèi)的光而產(chǎn)生的。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價(jià)電子和分子軌道上的電子在電子能級(jí)躍遷(原子或分子中的電子,總是處在某一種運(yùn)動(dòng)狀態(tài)之中。每一種狀態(tài)都具有一定的能量,屬于一定的能級(jí)。這些電子由于各種原因(如受光、熱、電的激發(fā))而從一個(gè)能級(jí)轉(zhuǎn)到另一個(gè)能級(jí),稱為躍遷。)當(dāng)這些電子吸收了外來輻射的能量就從一個(gè)能量較低的能級(jí)躍遷到一個(gè)能量較高的能級(jí)。因此,每一躍遷都對(duì)應(yīng)著吸收一定的能量輻射。具有不同分子結(jié)構(gòu)的各種物質(zhì),有對(duì)電磁輻射顯示選擇吸收的特性。吸光光度法就是基于這種物質(zhì)對(duì)電磁輻射的選擇性吸收的特性而建立起來的,它屬于分子吸收光譜。躍遷所吸收的能量符合波爾條件: