脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA試劑盒

時(shí)間：2011/11/4閱讀：1582

脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA試劑盒

（德國(guó)IBL進(jìn)口原裝，貨號(hào)：RE56921）

德國(guó)IBL中國(guó)*代理商“深圳科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司”竭誠(chéng)為您服務(wù)

1、應(yīng)用范圍

脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體ELISA試劑盒可用于血清和血漿中抗脊髓灰質(zhì)炎特異性IgG抗體的定量檢測(cè)。此試劑盒也可用來(lái)檢測(cè)其它體液，您可從IBL公司獲取。此試劑盒僅供體外診斷用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果從來(lái)都不可以作為醫(yī)學(xué)報(bào)告的*依據(jù)，醫(yī)學(xué)報(bào)告還得考慮病人病史和進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)。

2、前言說(shuō)明

脊髓灰質(zhì)炎是一種由腸道病毒引起的傳染病，它廣泛流行于世界各地，并常常導(dǎo)致病人癱瘓和死亡。人類(lèi)目前知道的人致病性脊髓灰質(zhì)炎有三種類(lèi)型：

1類(lèi)（Brunhilde）：通常會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的癥狀。

2類(lèi)（Lansing）：出現(xiàn)稍微溫和的癥狀。

3類(lèi)（Leon）：少，但伴隨嚴(yán)重癥狀。

脊髓灰質(zhì)炎病毒主要增生擴(kuò)展在腸道的淋巴節(jié)內(nèi)，并通過(guò)糞便排泄出去。咽喉也可能會(huì)感染脊髓灰質(zhì)炎病毒，之后病毒就會(huì)在人體口腔內(nèi)。人感染脊髓灰質(zhì)炎后，病毒就可以通過(guò)單核細(xì)胞分布到其它淋巴節(jié)，之后在淋巴節(jié)繁殖成各種各樣的脊髓灰質(zhì)炎病毒。在第二個(gè)viremic階段，病毒就停留在所有的器官和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的其它器官中。在90%以上感染了脊髓灰質(zhì)炎的病人都不會(huì)出現(xiàn)任何主觀(guān)癥狀。在其它剩余的病例中會(huì)出現(xiàn)：伴隨低燒的非特異性疾病、頭痛和喉嚨發(fā)炎、痢疾、惡心和嘔吐。伴隨有肌肉疼痛和大腦神經(jīng)的經(jīng)典麻痹癥非常少見(jiàn)。再次康復(fù)階段要持續(xù)兩年，而且常常會(huì)出現(xiàn)持久的破壞。脊髓灰質(zhì)炎目前還沒(méi)有治療方法，僅用阿司匹林和體操的對(duì)癥治療會(huì)有些效果。在亞洲地區(qū)的很多國(guó)家中，脊髓灰質(zhì)炎仍然是地方性的，但WHO已開(kāi)始了巨大的工程來(lái)*此疾病。在歐洲會(huì)有因旅游者帶進(jìn)的脊髓灰質(zhì)炎病例存在，有時(shí)候還是致命性的。在病毒潛伏期，通過(guò)檢測(cè)糞便或咽喉沖洗物中的傳染原或檢測(cè)血液中的抗體可診斷脊髓灰質(zhì)炎。血液抗體的檢測(cè)通常是通過(guò)中和檢測(cè)進(jìn)行的，雙份血清檢測(cè)有滴度差異，所以三種類(lèi)型脊髓灰質(zhì)炎病毒必須分別檢測(cè)。zui近，脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA實(shí)驗(yàn)用類(lèi)似白喉和百日咳的方法進(jìn)行了改進(jìn)，這種新的ELISA試劑盒可同時(shí)檢測(cè)三種類(lèi)型的脊髓灰質(zhì)炎病毒。這種血清學(xué)反應(yīng)是由既往感染或免疫接種所導(dǎo)致的。

3、實(shí)驗(yàn)原理

脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測(cè)試劑采用酶聯(lián)免疫的原理。脊髓灰質(zhì)炎抗原包被在包被板板條的微孔上。在包被板的微孔中加入稀釋好的病人血清或即用型的標(biāo)準(zhǔn)品，之后血清中的IgG抗體會(huì)結(jié)合到固相脊髓灰質(zhì)炎抗原上。室溫下溫育1小時(shí)后，用洗滌液洗板除去未結(jié)合的物質(zhì)。之后加入過(guò)氧酶標(biāo)記的即用型抗人IgG，溫育30分鐘。之后再洗板，洗板后加入TMB底物液并溫育20分鐘，此時(shí)溶液變成藍(lán)色。加入終止液終止酶反應(yīng)，溶液又藍(lán)色變成黃色，450nm處檢測(cè)OD值。IgG抗體的濃度與溶液所顯示的顏色強(qiáng)度成正比。

4、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

將試劑盒儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下，有效期（標(biāo)記在標(biāo)簽上面）內(nèi)穩(wěn)定。使用前，將所有成分平衡至室溫（18-25℃）。不用的板條應(yīng)當(dāng)重新密封好，試劑瓶的蓋子要蓋好，并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。打開(kāi)了的試劑盒必須在三個(gè)月內(nèi)用完。

5、樣品的采集與儲(chǔ)存

血清，血漿（EDTA，肝素）

按照靜脈穿刺的常規(guī)注意事項(xiàng)采集樣品，血液樣品自采集到實(shí)驗(yàn)時(shí)都必須保證其化學(xué)完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品。混濁的樣品應(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前離心以除去所有的顆粒性物質(zhì)。
儲(chǔ)存	2-8℃	≤-20℃	避免太陽(yáng)直射，避免反復(fù)凍融。
穩(wěn)定性	48小時(shí)	＞48小時(shí)	避免太陽(yáng)直射，避免反復(fù)凍融。

6、試劑盒成分

4×2ml	CAL A-D	標(biāo)準(zhǔn)品A-d：PBS稀釋的人血清，內(nèi)含抗脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體，另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane，即用。
1×14ml	ENZCONJ IgG	酶聯(lián)物：辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的抗人IgG和蛋白緩沖液。另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane及5mg/l的Proclin^TM，即用。
1×12×8	MTP	包被板：12條8孔的包被板，包被了脊髓灰質(zhì)炎抗原（純化病毒材料的疫苗，混合有1，2，3型病毒），即用。
1×14ml	TMB SUBS	TMB底物液，內(nèi)含TMB，即用。
1×14ml	TMB STOP	TMB終止液，0.5M的硫酸，即用。
1×60ml	DILBUF	稀釋緩沖液，PBS/BSA緩沖液，內(nèi)含0.095%的疊氮鈉，即用。
1×60ml	WASHBUF CON	洗滌緩沖液，10倍濃縮，PBS+吐溫20。
2×	FOIL	粘性金屬板，溫育期間用來(lái)蓋板用。
1×	BAG	塑料袋，可重新密封，用來(lái)儲(chǔ)存不用的板條。

7、實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒不提供

1） 5ul，100ul和500ul的多道移液器。

2）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀。

3）洗板機(jī)

4）用于血清稀釋的試管

5）蒸餾水

8、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明

8.1成分的準(zhǔn)備

稀釋/溶解	成分		稀釋劑	比例	備注	儲(chǔ)存	穩(wěn)定性
60ml	洗滌液	加入540ml	蒸餾水	1：10	如果有必要的話(huà)，加熱到37℃以溶解所有晶體，混合均勻	2-8℃	8周

8.2樣品的稀釋

樣品	稀釋	稀釋劑	比例	備注
血清/血漿	一般規(guī)律稀釋	稀釋緩沖液	1：101	5ul+500ul

如果樣品中的IgG濃度比zui高標(biāo)準(zhǔn)品的都要高，則樣品必須進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。

11、實(shí)驗(yàn)步驟

1	給標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品（雙份檢測(cè)）準(zhǔn)備足夠的板條，留一孔做空白對(duì)照。
2	將稀釋好的樣品、即用的標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品各100ul分別加入到相應(yīng)的微孔中，留出空白孔不要加，用來(lái)加底物液。
3	蓋板，室溫溫育60分鐘。
4	棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，并加入300ul稀釋好的洗滌液，重復(fù)洗板3次，棄取孔內(nèi)反應(yīng)夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
5	在每一微孔中加入100ul即用型的酶聯(lián)物，留出空白孔不要加。
6	蓋板，室溫溫育30分鐘。
7	棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，并加入300ul稀釋好的洗滌液，重復(fù)洗板3次，棄取孔內(nèi)反應(yīng)夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
8	在每一微孔中加入100ul即用型的底物液，留出空白孔不要加。
9	蓋板，室溫避光溫育20分鐘。
10	在每一微孔中加入100ul即用型的終止液以終止底物反應(yīng)，空白孔也要加底物液。
11	充分混合，450nm處讀取OD值，溶液所顯示的顏色60min內(nèi)穩(wěn)定。

12、質(zhì)量控制

嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟的實(shí)驗(yàn)結(jié)果才是有效的。使用者必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則或其它實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。就如試劑瓶標(biāo)簽所述：所有的控制品都必須建立在一個(gè)可以接受的范圍內(nèi)。如果其標(biāo)準(zhǔn)不符合要求，那么實(shí)驗(yàn)則無(wú)效，必須重做。為了能進(jìn)一步研究，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都必須知道所有的樣品。如果實(shí)驗(yàn)背離實(shí)際結(jié)果，應(yīng)檢查以下參數(shù)：試劑有效期，貯存條件，取樣器，實(shí)驗(yàn)設(shè)備，溫育時(shí)間，清洗方法。

13、結(jié)果評(píng)價(jià)

平均OD值是檢測(cè)OD值減去空白孔數(shù)值之后的平均值，兩孔間數(shù)值的差異不能超過(guò)10%。

	OD值	矯正后的OD值	平均OD值
空白孔	0.019
標(biāo)準(zhǔn)品A（陰性質(zhì)控）	0.112/0.134	0.103/0.115	0.109
標(biāo)準(zhǔn)品B（臨界質(zhì)控）	0.410/0.472	0.391/0.453	0.421
標(biāo)準(zhǔn)品C（弱陽(yáng)性質(zhì)控）	1.069/1.121	1.050/1.102	1.076
標(biāo)準(zhǔn)品D（陽(yáng)性質(zhì)控）	2.186/2.220	2.167/2.201	2.184

上面表格只是個(gè)例子，所有數(shù)值都是當(dāng)時(shí)的溫度和條件下獲得的，因此上述數(shù)值不能當(dāng)作參考值，參考值必須從其它實(shí)驗(yàn)室去獲取。

13.1定量評(píng)價(jià)

脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒的即用型標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品用的是一個(gè)專(zhuān)門(mén)的單位進(jìn)行定義表述的（U/ml）。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果并且可以重復(fù)定量評(píng)價(jià)的話(huà)，則結(jié)果有可能可以作為后續(xù)病人的質(zhì)控品。質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品的濃度請(qǐng)見(jiàn)試劑瓶標(biāo)簽。定量檢測(cè)時(shí)，用標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的OD值對(duì)其濃度在坐標(biāo)紙上進(jìn)行標(biāo)繪，之后每一病人樣品的濃度值可以用其OD值從此參考曲線(xiàn)上定量得到。我們可以用計(jì)算機(jī)程序自動(dòng)計(jì)算記過(guò)，濃度計(jì)算時(shí)，樣品的稀釋因子要重新被考慮進(jìn)去。

14、特性

將弱陽(yáng)性質(zhì)控重復(fù)檢測(cè)10次可以得到脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG試劑盒的板內(nèi)差異，其板內(nèi)差異小于10%。

本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。

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