金屬蛋白酶組織抑制因子Elisa試劑盒

時間：2011/11/9閱讀：1641

金屬蛋白酶組織抑制因子Elisa試劑盒

德國IBL*，貨號：RE54081

德國IBL中國*代理商“深圳科潤達(dá)生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)

預(yù)期用途

此試劑盒用于人血漿中TIMP-1的體外定量檢測

簡介

細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白水解在許多生理和病理過程中發(fā)揮著重要的作用，其中一關(guān)鍵因素是基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）和其內(nèi)源抑制劑

多數(shù)研究顯示，MMP參與了部分腫瘤的發(fā)展，如結(jié)腸癌，胃癌，肺癌，乳腺癌

組織中的蛋白水解活性受內(nèi)源性蛋白酶抑制劑調(diào)節(jié)，zui重要的MMP內(nèi)源抑制劑就是TIMPs

TIMP-1是一N末端糖基化蛋白。由184個氨基酸組成，分子量為28kDa

TIMP-1在不同的生理過程中對細(xì)胞外基質(zhì)穩(wěn)態(tài)的維持發(fā)揮了關(guān)鍵作用，細(xì)胞外基質(zhì)的敏感平衡一旦破壞，將會導(dǎo)致許多病理生理反應(yīng)，如炎癥，慢性退行性疾病和腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和血管再生

除了這些MMP抑制活性外，還有一些不是依靠TIMPs而發(fā)揮作用的，如抗凋亡過程，刺激細(xì)胞增殖和血管再生導(dǎo)致的腫瘤增殖和惡性轉(zhuǎn)化，這時的TIMPs則作為各癌癥的陰性預(yù)后標(biāo)記物。TIMP-1成為了目前癌癥研究診斷的焦點

實驗原理

此實驗基于夾心原理。包被板包被了抗TIMP-1多克隆抗體，樣品中的TIMP-1特異性結(jié)合包被抗體，由HRP標(biāo)記的鼠二抗分析檢測，底物反應(yīng)催化酶聯(lián)檢測系統(tǒng)，顏色強(qiáng)度與樣品中的TIMP-1的量成正比，樣品結(jié)果可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取

注意事項

1. 試劑僅供體外診斷和專業(yè)人士使用。

2. 開始試驗前，請仔細(xì)閱讀說明書，確定所有的事項都已明白。

3. 如果試劑盒有破壞的請與IBL公司或是提交您的投訴單，但自您拿到試劑盒后zui遲不超過一個星期。嚴(yán)重破損的成分不能用于實驗，將其保存好直至找到zui終的解決辦法。之后，按照*條例將其處理掉。

4. 確認(rèn)批號和有效期，不要將不同批號的試劑混合，不要使用過期試劑。

5. 遵守實驗室規(guī)章制度，按規(guī)定著裝，當(dāng)必要時帶上保護(hù)性眼鏡。

6. 試劑盒內(nèi)的試劑包含危險品可能會刺激眼睛跟皮膚，詳細(xì)見提供的材料和標(biāo)簽。產(chǎn)品的材料安全數(shù)據(jù)能夠從IBL公司主頁上下載，也可直接咨詢IBL公司獲取。

7. 按照相應(yīng)的國家生物安全管理條理*的方法處理樣品和試劑。

8. 避免接觸終止液，它可能會刺激和灼傷皮膚。

9. 試劑盒中的所有試劑包括檢測過的人血清/血漿對HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，但是試劑中會出現(xiàn)此類病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除。因此，所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理。

貯存和穩(wěn)定性

試劑盒應(yīng)當(dāng)在2~8℃運輸和儲存，避免高溫和陽光直射。準(zhǔn)備好的試劑的儲存及其穩(wěn)定性在相應(yīng)章節(jié)已闡明。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。

樣品采集和貯存

注意：不要使用血清，因為在血清制備過程中，a-粒細(xì)胞會不受控制的釋放出TIMP-1。TIMP-1只能用血漿檢測

血漿（EDTA）

注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測時都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實驗前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。
儲存	2-8℃	≤-20℃	避免熱源和太陽直射，避免反復(fù)凍溶。
穩(wěn)定性	48小時	6個月	避免熱源和太陽直射，避免反復(fù)凍溶。

試劑盒組成

劑量/數(shù)量	標(biāo)志	成分/部件
1×12×8	MTP	微量滴定板（包被板）可拆，包被了抗-TIMP-1抗體（羊）
1×0.1mL	ENZCONJ CONC	酶聯(lián)物（101×）濃縮 HRP標(biāo)記的抗TIMP-1抗體，穩(wěn)定劑
6×0.5mL	CAL A-F	標(biāo)準(zhǔn)品A-F 濃度為：0,10.2,51,102,204,510ng/ml 即用，包含：TIMP-1，穩(wěn)定劑
2×0.5mL	Control 1+2	質(zhì)控品 1+2 即用，包含：TIMP-1，穩(wěn)定劑濃度/可接受范圍見質(zhì)控單
1×12mL	ASSAYBUF CONC	試驗緩沖液，20X 包含：磷酸緩沖液，BSA和Proclin300
1×100mL	WASHBUF CONC	洗滌液，（10×）濃縮包含：磷酸緩沖液，吐溫
1×12mL	TMB SUBS	TMB底物液即用，包含：TMB，緩沖液，穩(wěn)定劑
1×12mL	TMB STOP	TMB終止液即用，包含：0.5M 硫酸
3×	FOIL	粘合金屬板（封板片）

實驗所需材料但試劑盒未提供

1. 移液器體積：5,20,50,100,1000ul

2. 一次性玻璃試管

3. 混合器

4. 8通道移液器

5. 洗瓶，全自動或半自動洗板機(jī)

6. 酶標(biāo)儀

7. 去離子水或雙蒸水

8. 吸水紙，槍頭和計時器

操作注意事項

1．樣品處理不當(dāng)或者修改實驗步驟都會影響到結(jié)果，必須嚴(yán)格按照說明書的步驟進(jìn)行實驗。

2．一旦實驗開始，所有步驟必須完整的進(jìn)行下去，必須確定實驗所需的試劑及物品都在適當(dāng)時間內(nèi)準(zhǔn)備好，實驗開始前讓試劑和樣本都平衡至室溫，（18~25℃），試劑和樣本在使用之前混勻應(yīng)避免起泡沫。

3．避免污染試劑，槍頭和微孔/管。每個微孔的加樣都應(yīng)該用新的槍頭，避免將不同試劑的蓋子蓋錯，用完試劑后要蓋好蓋，不要重復(fù)使用用過的微孔/管、試劑。

4. 有些組分溶液＜250ul，打開瓶蓋之前確保溶液全部在瓶底

5．建議對樣本進(jìn)行兩次測試，鑒定潛在的吸量錯誤

6．設(shè)計一個合適的包被板布局

7．孵育時間影響結(jié)果，所有的孔必須在同樣順序和時間間隔下加樣，這里推薦使用8道移液器加樣。

8．洗板是非常重要的，不恰當(dāng)?shù)南窗鍟?dǎo)致錯誤的結(jié)果。這里推薦使用洗板機(jī)。孵育時不要讓孔干燥。小心地棄去試劑，當(dāng)洗板時應(yīng)當(dāng)讓孔內(nèi)裝滿洗滌緩沖液，并且沒有其他殘留物留在孔內(nèi)。

9．濕度會影響包被孔/管。在平衡至室溫之前不要開袋。沒有使用的板孔應(yīng)立即用含有干燥劑的可重封小袋重新封緊。

試劑準(zhǔn)備

凍干或濃縮成分的準(zhǔn)備

稀釋溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	穩(wěn)定性
10ml	洗滌濃縮液	90ml	去離子水	1:10	充分混勻	2-8℃	4周
1ml	試驗緩沖濃縮液	19ml	去離子水	1:20	充分混勻	2-8℃	1周
20ul	酶聯(lián)物濃縮	2ml	稀釋的試驗緩沖液	1:101	混勻，避免產(chǎn)生氣泡	現(xiàn)配現(xiàn)用

樣品稀釋

病人樣品			比例	備注
血漿（EDTA）	常規(guī)稀釋	稀釋的試驗緩沖液	1:51	e.g. 10 µL + 500 µL

實驗步驟

1. 吸取50ul的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和病人樣品于相應(yīng)的孔內(nèi)

2. 每孔加入50ul的稀釋的酶聯(lián)物，蓋板，小心振蕩微孔板

3. 室溫下（18-25℃）孵育90min

4. 移去蓋板，棄去廢液，每孔加入250ul的洗滌液洗板5次，吸水紙上拍干

5. 每孔加入100ul的TMB底物液

6. 室溫下孵育30min

7. 每孔加入100ul的終止液，小心混勻，液體顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色

8. 加入終止液后15min 內(nèi)酶標(biāo)儀上讀數(shù)

計算結(jié)果

在半對數(shù)坐標(biāo)紙上或自動計算的方法，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（Y軸，線性）對其濃度（X軸，對數(shù)）做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程可以得到更好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在推算標(biāo)準(zhǔn)曲線時，應(yīng)當(dāng)充分利用好每一個標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)值（明顯逸出的數(shù)值應(yīng)當(dāng)被忽略，再使用更合理的數(shù)值代替它）。樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接讀取

將稀釋了的樣品結(jié)果乘以稀釋因子即可得到其相應(yīng)的結(jié)果

附：采用全自動酶標(biāo)儀檢測，只需檢測前設(shè)置好酶標(biāo)儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標(biāo)參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果

正常值

此檢驗結(jié)果不能作為治療結(jié)果的*原因，還應(yīng)結(jié)合臨床觀察和診斷試驗

健康人群EDTA血漿中的TIMP-1的值低于100ng/ml（95%：100ng/ml；90%：80ng/ml）

我們建議每個實驗室都應(yīng)建立自己的正常值范圍

檢驗方法的局限性

樣品的采集對試驗結(jié)果有著重要的影響，請仔細(xì)閱讀“樣品采集和貯存”的部分

以下物質(zhì)低于下面所述濃度，其實驗結(jié)果都會不明顯

血紅蛋白	8mg/ml
膽紅素	5mg/ml
甘油三酯	91mg/ml

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)

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