細胞粘附分子ELISA檢測試劑盒是一種用于檢測細胞表面粘附分子水平的實驗工具。其原理主要包括以下幾個步驟:
樣本處理:將待測樣本(如細胞上清液、組織提取物等)加入已經(jīng)涂有特定抗體的微孔板中,使樣本中的目標分子與固相抗體發(fā)生特異性結(jié)合。
洗滌:洗去未結(jié)合的雜質(zhì)和非特異性結(jié)合物,以保證后續(xù)步驟的準確性。
二級抗體結(jié)合:添加與待測目標分子不同表位上標記有酶(如辣根過氧化物酶-HRP)的次級抗體。該次級抗體可以識別并結(jié)合到待測目標分子上。
再次洗滌:洗去未結(jié)合的二級抗體。
底物反應:向孔內(nèi)加入適當?shù)孜?,使酶催化產(chǎn)生可量化信號。通常使用底物TMB(3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺)來生成一個可見的藍色產(chǎn)物。
反應停止:通過添加停止溶液(如硫酸或鹽酸)停止底物反應,產(chǎn)生的藍色產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。
讀取結(jié)果:使用酶標儀檢測光密度值(OD值),其與待測樣本中目標分子的含量呈正相關(guān)關(guān)系。通常將待測樣本的OD值與標準曲線進行比較,從而確定目標分子的濃度。
細胞粘附分子ELISA檢測試劑盒通過這一原理,可以快速、準確地定量分析細胞表面粘附分子的水平,并在許多實驗和研究領(lǐng)域中得到廣泛應用,如腫瘤學、免疫學、神經(jīng)科學等。