C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
（德國(guó)DRG*貨號(hào)EIA4584 規(guī)格96T）
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實(shí)驗(yàn)原理
包被板上包被有抗CRP抗體，與稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣本一起孵育，孵育中，CRP特異性結(jié)合包被抗體，洗板除去未結(jié)合的血清蛋白，抗原-抗體混合物與過(guò)氧化物酶酶聯(lián)物抗體反應(yīng)，洗滌除去為結(jié)合酶聯(lián)物，加入含有TMB和過(guò)氧化氫的著色液孵育，與微孔板結(jié)合的免疫復(fù)合物的量與顏色強(qiáng)度成正比，加0.5M硫酸終止反應(yīng)，450nm處檢測(cè)吸光值
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度和OD值做標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本CRP濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出
此試劑盒在美國(guó)僅用于科研
 
試劑盒組成
 

1. 包被板，96孔，包被有抗人CRP單克隆抗體
2. 標(biāo)準(zhǔn)品，5瓶，0.2ml，含1/10的預(yù)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，濃度為：0；0.4；1；5；10ug/ml
3. 酶聯(lián)物，1瓶，12ml，含過(guò)氧化物標(biāo)記的抗人CRP單抗；抗菌劑和惰性紅色染料
4. 樣本稀釋液，1瓶，40ml，5X濃縮，含0.09%NaN 3和抗菌劑，惰性綠色染料
5. 洗滌液，1瓶，50ml，20X濃縮，含磷酸緩沖洗滌液
6. 底物液，1瓶，15ml，含過(guò)氧化氫和TMB
7. 終止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸

 
實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供
 

1. 移液器和槍頭
2. 標(biāo)準(zhǔn)容積的潔凈玻璃器皿
3. 樣本稀釋用的潔凈玻璃試管
4. 酶標(biāo)儀（450nm）

 
貯存條件
2-8℃
 

1. 將微孔板條貯存于原裝含干燥劑的密封袋內(nèi)，直至全部用完
2. 不要使用過(guò)期的試劑

 
樣本采集與準(zhǔn)備
此實(shí)驗(yàn)可用到血清和血漿
采樣后立即分離出血清，避免使用溶血，脂血或黃疸血，可能回導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果
將血清轉(zhuǎn)移干凈試管
樣本可在2-8℃下貯存幾天，或凍存更長(zhǎng)時(shí)間，避免反復(fù)凍融
 
一般注意事項(xiàng)
1使用一次性加樣槍頭加樣，避免交叉污染．
2實(shí)驗(yàn)前，將所有試劑平衡至室溫．試劑混勻時(shí)避免產(chǎn)生氣泡．
3一旦實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，所有實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)中斷進(jìn)行
4吸光值是孵育時(shí)間和溫度的一條函數(shù)．所以應(yīng)控制好實(shí)驗(yàn)加樣，建議每次只做20份樣品和一組標(biāo)準(zhǔn)品，作雙份檢測(cè)．
 
試劑準(zhǔn)備
 
洗滌液：用去離子水稀釋50ml的洗滌濃縮液至總體積為1000ml，稀釋洗滌液可在2-8℃下至少放置1個(gè)月
 
過(guò)高溫度可能回引起濃縮洗滌液出現(xiàn)渾濁，其并不會(huì)有影響，稀釋后就會(huì)變澄清
 
樣本稀釋液：用去離子水稀釋40ml的樣本稀釋濃縮液至總體積為200ml，2-8℃下可放置3個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間，始終保持澄清
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 

1. 10倍預(yù)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品血清按如下方法進(jìn)行1:100稀釋：

10ul的標(biāo)準(zhǔn)品至稀釋試管內(nèi)，加990ul的已稀釋的樣本稀釋液，混合
 

1. 樣本按1:1000分兩步進(jìn)行稀釋：10ul的樣本血清與990ul的已稀釋的樣本稀釋液，混合；加450ul的已稀釋的樣本稀釋液與50ul的100X的預(yù)稀釋樣本，混合（注意：稀釋樣本貯存不要超過(guò)8小時(shí)）
2. 將100ul的稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加入相應(yīng)微孔內(nèi)
3. 室溫下蓋板孵育30±2min
4. 洗滌緩沖液洗板3次

可選用合適的自動(dòng)洗板機(jī)洗板，或手動(dòng)洗板：迅速倒到孔內(nèi)反應(yīng)液，再注入稀釋洗滌液．第三次洗板時(shí)，讓稀釋洗滌液在微孔內(nèi)停留2－3分鐘．每次洗板都要換新的稀釋洗滌液．zui后倒掉所有溶液并在吸水紙上拍干，去除殘留液滴．
 

1. 每孔加100ul的酶聯(lián)物，蓋板室溫下孵育30±2min
2. 重復(fù)步驟5）洗板
3. 每孔加100ul的底物液
4. 避光，室溫下孵育10±2min
5. 每孔加50ul的終止液
6. 加入終止液后，30min內(nèi)450nm處酶標(biāo)儀上讀數(shù)

 
結(jié)果分析與說(shuō)明
以標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度均值與相應(yīng)的濃度建立*標(biāo)準(zhǔn)曲線．
患者樣品的濃度通過(guò)測(cè)的吸光值直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度．
根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或可利用的計(jì)算機(jī)方法，也可用其它數(shù)據(jù)簡(jiǎn)化分析．
zui低檢測(cè)濃度
zui低檢測(cè)濃度約為0.02 µg/ml.
 
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