注意

人體內(nèi)的兒茶酚氨和間甲腎上腺素的釋放會(huì)受到一些食品和藥物的影響。因此在樣品采集前72小時(shí)內(nèi)病人應(yīng)禁止服用下列食物和藥品：維生素B，咖啡，香蕉，α甲基多巴，MAO，COMT抑制劑，還有降血壓類(lèi)藥物。

注意

血液采集后兩小時(shí)內(nèi)，將血液樣品冷藏于2-8℃的環(huán)境下直致離心獲取血漿。

注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項(xiàng)。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測(cè)時(shí)都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。

貯存

2-8℃

≤-20℃

避免熱源或太陽(yáng)直射，避免反復(fù)凍融，冷凍狀態(tài)下運(yùn)輸樣品。

穩(wěn)定性

6h

1個(gè)月

可以是自然尿液也可使用24h尿液。將病人24h內(nèi)的所有尿液都收集到，并混合于含10-15ml 6N的HCl防腐劑的試劑瓶中。

貯存

≤-20℃

避免熱源或太陽(yáng)直射，避免反復(fù)凍融，冷凍狀態(tài)下運(yùn)輸樣品。

穩(wěn)定性

6個(gè)月

數(shù)量

標(biāo)志

成分

1×12×8

MTP

包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，單克?。?。

1×6×2.5ml

CAL A-F

標(biāo)準(zhǔn)品A-F，即用

腎上腺素:0;1.5;15;50;150ng/ml（0;8;27;82;273;819nmol/L）

去甲腎上素:0;5;15;50;150;500ng/mL（0;30;89;296;887;2955nmol/L）

多巴胺:0;12;35;115;450;2250ng/mL（0;78;228;750;2938;14688nmol/L）

內(nèi)含[-]腎上腺素，[-]去甲腎上腺素，[-]多巴胺（有生物活性）,0.1M的HCl

1×2×2.5ml

CONTROL 1+2

質(zhì)控品1+2

即用,含: [-]腎上腺素，[-]去甲腎上腺素，[-]多巴胺（具有生物活性）,0.1M的HCl,具體濃度及可允許范圍請(qǐng)見(jiàn)試劑瓶標(biāo)簽.

1×250μL

ENZCONJ CONC

酶聯(lián)物 濃縮型（100×）

內(nèi)含：堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體，Tris緩沖液，HCl，0.01%的NaN3

2×

EXTRPLATE

提取板（微孔板）

每板24孔，包被了硼酸親和凝膠。

1×60ml

EXTRBUF

提取緩沖液

粉紅色，即用，內(nèi)含：0.016%的NaN3

2×1.25ml

COMT LYO

COMT凍干粉

內(nèi)含：兒茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶（豬肝），NaN3

1×2ml

COMT ADD

COMT添加劑

內(nèi)含：人血漿，穩(wěn)定劑，0.01%硫柳汞。

1×7ml

ANTISERUM DO

去甲腎上腺素抗血清

紫羅蘭色，即用，內(nèi)含：抗去甲腎上腺素抗體（兔），緩沖液，穩(wěn)定劑。

2×1.25ml

COENZ

酶聯(lián)復(fù)合物

即用，內(nèi)含：S-腺苷-L-蛋白酸，穩(wěn)定劑。

1×3ml

ENZBUF

酶緩沖液

即用，內(nèi)含：Tris緩沖液，HCl，穩(wěn)定劑。

1×17ml

RELEASEBUF

Release緩沖液

黃色，即用，內(nèi)含：0.1M的HCl，指示劑。

1×3ml

ACYLREAG

?；噭?/span>

即用，內(nèi)含：二甲基甲酰胺，乙醇。注意：有毒，高可燃性。

1×50ml

WASHBUR CONC

洗滌液 濃縮型（10×）

內(nèi)含：Tris緩沖液，HCl，吐溫，0.2%的NaN3

1×9×

PNPP SUBS

PNPP底物片

內(nèi)含：對(duì)硝基苯磷酸（PNPP）

1×27ml

PNPP BUF

PNPP底物緩沖液

即用，內(nèi)含：二乙醇胺，水，0.05%的NaN3

1×15ml

PNPP STOP

PNPP終止液

即用，內(nèi)含：1M的NaOH，0.25M的EDTA

3×

FOIL

粘性金屬板

注意

用于96人份檢測(cè)色試劑盒成分可分成兩次進(jìn)行。，下列所述體積為做48人份時(shí)所需要的量。

樣品

待稀釋

稀釋液

備注

血漿

去甲腎上腺素濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品中去甲腎上腺素的濃度

雙蒸水

提取步驟前

尿液

去甲腎上腺素濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品中去甲腎上腺素的濃度

0.1N的HCl

提取步驟前

1）

將標(biāo)準(zhǔn)品、已稀釋好的質(zhì)控品、已稀釋好的尿液樣品各20μL和500μL血漿樣品加入到提取板相應(yīng)的微孔中。除血漿樣品孔外，在所有的微孔中加入500μL雙蒸水以消除體積差別。

2）

在每一微孔中加入1000μL提取緩沖液

3）

蓋板。在軌道搖床（600-900rpm）上18-25℃的環(huán)境下提取30min。在提取過(guò)程中，液體的表面應(yīng)該會(huì)浸濕粘性金屬板，但液體的量不能超過(guò)微孔的2/3。液體是否濺出并不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4）

移去粘性金屬板，快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，在吸水紙上拍干。

5）

每孔加入2ml雙蒸水

6）

用新的粘性金屬板蓋板。在軌道搖床上（600-900rpm）18-25℃的環(huán)境下振蕩5min。液體是否濺出并不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

7）

移去粘性金屬板，快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，在吸水紙上拍干。

8）

每孔加入150μL提取緩沖液，再向每孔中加入50μL?；噭⒓椿旌暇鶆?。

9）

在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下提取20min。（無(wú)需蓋板）

10）

快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，在吸水紙上拍干。

11）

每孔加入2ml雙蒸水。

12）

用新的粘性金屬板蓋板。在軌道搖床上（600-900rpm）18-25℃的環(huán)境下振蕩5min。液體是否濺出并不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

13）

移去粘性金屬板，快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，在吸水紙上拍干。

14）

每孔加入300μL Release緩沖液。

15）

在軌道搖床（400-500rpm）上18-25℃的環(huán)境下振蕩30min。（無(wú)需蓋板）

注意：COMT酶溶液應(yīng)在使用前直接臨時(shí)配置。

在COMT凍干粉中加入1.25ml雙蒸水，充分混和。再加入1.25ml酶聯(lián)溶液，然后再加入1.25ml酶溶液和0.40ml COMT添加劑以充分混合溶解的COMT試劑*，COMT酶溶液zui后的體積為每支4.15ml。一支可做48人份。溶液可用旋渦混合器混合，但要避免氣泡產(chǎn)生，配置好的COMT溶液可在室溫下穩(wěn)定存放1小時(shí)。

注意

如果要檢測(cè)腎上腺素和去甲腎上腺素，我們建議您先檢測(cè)腎上腺素。如果使用自動(dòng)置換型衣液器加樣，請(qǐng)將取樣吸頭內(nèi)的殘余液體加入到提取板的相應(yīng)微孔內(nèi)，否則剩余的提取液不夠去甲腎上腺素檢測(cè)用。將提取板放到有一定坡度的位置上。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，確定好腎上腺素和去甲腎上腺素的檢測(cè)孔并標(biāo)記好。

1

在每一微孔內(nèi)加入25ul臨時(shí)配制的COMT酶溶液，輕輕振板以使溶液混合均勻。

2

將提取好的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品分別25ul加入到相應(yīng)的微孔內(nèi)。在此步驟中，我們可以將取樣吸頭直接深入到COMT溶液里。加樣后，溶液顏色變成粉色，輕輕振板以使溶液混合均勻。

3

向每一微孔中加入50ul去甲腎上腺素抗血清（藍(lán)色）。

4

蓋板，在軌道搖床上（400-600rpm）18-25℃的環(huán)境下孵育120min。

稀釋

成分

稀釋液

比例

備注

貯存

穩(wěn)定性

20ml

洗滌液

180ml

雙蒸水

1：10

充分混合

2-8℃

4W

60μL

酶聯(lián)物

6ml

洗滌緩沖液（已稀釋好）

1：101

臨時(shí)配置，僅能使用一次，混合時(shí)避免氣泡產(chǎn)生

18-25℃

30min

4

PNPP底物片

10.7ml

PNPP底物緩沖液

臨時(shí)配置，僅能使用一次

18-25℃

10min