利什曼原蟲檢測試劑

科潤達(dá)生物有提供美國Cortez品牌和德國DRG品牌的利什曼原蟲檢測試劑，兩個品牌的試劑都是采用ELISA方法進(jìn)行檢測，該方法操作簡單方便，無需特殊儀器、產(chǎn)品靈敏度高，特異性強(qiáng)，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。利什曼原蟲檢測試劑應(yīng)用于科研使用。下面是關(guān)于利什曼原蟲檢測試劑的產(chǎn)品信息介紹。更多產(chǎn)品信息可咨詢我們獲取。

中文名稱：利什曼原蟲檢測試劑
英文名稱：Leishmania detection reagent
產(chǎn)品貨號：8203-35
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測方法：ELISA
產(chǎn)品品牌：美國Cortez
供應(yīng)商家：深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司

預(yù)期用途
利什曼原蟲檢測試劑可用于定性篩選血清中的內(nèi)臟利什曼原蟲IgG抗體 。僅用于科研使用。

利什曼原蟲病介紹

利什曼原蟲是一種影響了世界上數(shù)百萬人口的普遍疾病。從世界范圍來看，利什曼蟲已經(jīng)成為一種遍布各大洲嚴(yán)重的感染病，尤其是歐洲，印度，亞洲，非洲和中東地區(qū)。

內(nèi)臟利什曼病，又稱為黑熱病，是通過被感染的白蛉叮咬傳播給人類的，這種白蛉寄生于杜氏利什曼蟲復(fù)合體。當(dāng)白蛉與接觸感染對象（比如狗）接觸后就成為利什曼蟲的宿主了。

由于內(nèi)臟利什曼蟲攻擊肝脾等內(nèi)臟系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)，通常利什曼蟲已與AIDS感染密切相關(guān)。內(nèi)臟利什曼原蟲是一種高死亡率的嚴(yán)重疾病。

實驗方法對比
下面幾種測試方法已用于診斷急性內(nèi)臟利什曼病。例如，間接熒光免疫抗體測試（IFAT)和直接凝集實驗（DAT）是實踐中的兩個血清學(xué)診斷方法，這是因為抗利什曼蟲抗體的滴度在急性階段通常很高。另一個不太成功的方法是骨髓穿刺。這種方法不僅痛苦和危險，而且成功率也不高。另外，ELISA方法是目前受歡迎的血清學(xué)診斷方法，有時會與IFAT和DAT結(jié)合使用。

實驗原理

利什曼蟲的ELISA試驗原理是一個三步溫育過程：

初次溫育涉及利什曼蟲抗原在ELISA板孔上的包被。在這一步中，任何與抗原反應(yīng)的抗體都會結(jié)合到板孔中。然后，洗凈板孔除去測試樣品。隨后加入酶標(biāo)記物。

在第二次溫育時，酶標(biāo)記物將與任何存在的抗體結(jié)合。

在第三次溫育前，需要充分洗滌板孔。然后加入顯色劑四甲基聯(lián)本胺（TMB)。酶標(biāo)記物催化過氧化氫的氧化反應(yīng)，顯色劑變?yōu)樗{(lán)色。加入終止液后藍(lán)色會變?yōu)槊髁恋狞S色。反應(yīng)即終止?？捎妹笜?biāo)分析儀讀取實驗結(jié)果。

樣品收集和準(zhǔn)備
1. 凝血及分離的血清。如果不能立即使用，則需要將樣品凍存于-20ºC甚至更低的環(huán)境下。
2. 不要加熱滅活血清。
3. 避免反復(fù)凍融樣品。

利什曼原蟲檢測試劑成分
1. ELISA板：包被了利什曼蟲抗原的微量滴定板,96孔式。
2. 酶標(biāo)記物：1×11ml/瓶，含硫柳泵穩(wěn)定緩沖液的辣根過氧化物酶（HRP)。
3. 陽性質(zhì)控：1×1ml/瓶，含硫柳泵緩沖液的稀釋利什曼蟲陽性人血清。
4. 陰性質(zhì)控：1×1ml/瓶，含硫柳泵緩沖液的稀釋利什曼蟲陰性人血清。
5. TMB底物溶液：1×11ml/瓶，TMB顯色劑。
6. 濃縮洗滌液20X：1×25ml/瓶，濃縮緩沖液和表面活性劑。
7. 稀釋緩沖液：2×30ml/瓶，緩沖蛋白溶液。
8. 終止液：1×11ml/瓶，濃度為1mol/L的磷酸。

實驗需要但未提供的設(shè)備
  1. 移液管
  2. 洗滌板條用的擠壓瓶
  3. 去離子水
  4. 帶有450nm和620-650nm波長濾光片的酶標(biāo)分析儀（可選目測讀取結(jié)果）
  5. 血清稀釋用試管

實驗步驟
1. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上2個質(zhì)控品決定所需的板條數(shù)，并將其放置在托架上。
2. 加入100µl的陰性質(zhì)控至1號孔，100µl的陽性質(zhì)控至2號孔，以及將100µl稀釋過的樣品（1：40）溶液加入到剩下的孔中。（注意：陰性及陽性質(zhì)控品是預(yù)稀釋過的，請勿進(jìn)一步稀釋）
3. 在室溫（15-25℃）下溫育10分鐘。
4. 震蕩甩出洗滌液，并用稀釋過的洗滌緩沖液清洗三次。
5. 每孔加入2滴酶標(biāo)物。
6. 室溫下溫育10分鐘。
7. 震蕩甩出洗滌液，并用洗滌緩沖液清洗三次。
8. 每孔加入2滴顯色劑。
9. 在室溫下溫育5分鐘。
10. 加入2滴終止液，輕敲ELISA板使孔內(nèi)溶液混合。
11. 對空氣讀數(shù)調(diào)零后讀取450nm處的OD值（參考波長620-650nm）
 

洗滌包括用稀釋的洗滌緩沖液填充每一個板孔，震蕩甩出內(nèi)容物后重復(fù)此操作三次。洗滌過程中孔內(nèi)避免產(chǎn)生氣泡。每次使用試劑盒進(jìn)行實驗時，都需要使用質(zhì)控品。

性能特點
敏感度：30/31=97%
特異性：53/63=84%


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