登革熱IgG ELISA試劑盒

登革熱IgG ELISA試劑盒產(chǎn)品詳細(xì)

登革熱IgG檢測(cè)試劑盒預(yù)期用途

DENV Detect MAC-ELISA檢測(cè)試劑是一種用來檢測(cè)人是否感染登革熱病毒的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，登革熱IgG檢測(cè)試劑盒可以檢測(cè)出人血清中是否存在抗登革熱病毒源性重組抗原（DENVRA I-IV）的IgG抗體。此診斷實(shí)驗(yàn)可輔助診斷人是否感染了登革熱病毒。此試劑盒不能用于篩查血液或血液成分，僅供科研使用。

登革熱IgG ELISA試劑盒檢測(cè)原理

DENV Detect IgG ELISA試劑盒是由一種酶聯(lián)擴(kuò)大的兩步法免疫檢測(cè)系統(tǒng)。在此實(shí)驗(yàn)中，將登革熱檢測(cè)陰性質(zhì)控（代表不反應(yīng)的血清）、陽性質(zhì)控和未知抗體濃度的血清樣品加入到包被了抗人IgG抗體的微孔中溫育，登革熱IgG試劑盒的血清樣品必須用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋。溫育并洗板后，用HRP標(biāo)記的DENVRA特異性抗體處理。第二次溫育并洗板后，加入TMB底物液進(jìn)行溫育。之后再加入酸性終止液，450nm處測(cè)OD值可確定底物反應(yīng)的程度。當(dāng)高于一定數(shù)值時(shí)（臨界值），樣品的吸光度值可確定樣品中是否存在登革熱抗體。
注意：陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控以內(nèi)在質(zhì)控形式提供，其目的是為了監(jiān)測(cè)試劑盒成分的完整性。

登革熱IgG ELISA試劑盒成分

登革熱IgG ELISA試劑盒提供了足夠做96人份所需要的試劑。試劑盒成分如下：
登革熱檢測(cè)特定材料：
■人抗登革熱IgG抗體包被的包被板：帶板蓋的板架，登革熱IgG抗體包被的96孔包被板。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
■樣品稀釋液：1瓶，25ml，內(nèi)含0.05%的Proclin防腐劑。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：如果出現(xiàn)沉淀的話，將試管旋渦下獲得勻漿再使用。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定
■登革熱檢測(cè)陰性質(zhì)控：1支，50ul的熱滅活血清，登革熱檢測(cè)陰性質(zhì)控可輔助監(jiān)測(cè)試劑盒的完整性。-20℃至-70℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定，使用前快速旋轉(zhuǎn)試管，收集底部溶液使用。
■登革熱檢測(cè)IgG陽性質(zhì)控：1支，50ul的熱滅活血清，登革熱陽性質(zhì)控可輔助監(jiān)測(cè)試劑盒的完整性。-20℃至-70℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定，使用前快速旋轉(zhuǎn)試管，收集底部溶液使用。
■10倍濃縮洗滌液：1瓶，120ml洗滌液，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
■HRP標(biāo)記的即用型酶聯(lián)物，1瓶，6ml，HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
■Enwash：1瓶，20mlEnwash溶液。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定（內(nèi)含0.1%的Proclin）。
■TMB底物液：1瓶，9ml液態(tài)底物液，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：底物液必須始終儲(chǔ)存于避光試劑瓶中。
■終止液：1瓶，內(nèi)含6ml即用型的終止液，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：強(qiáng)酸，請(qǐng)戴保護(hù)手套、口罩和安全鏡，按照安全條理處理所有的材料。

登革熱IgG檢測(cè)實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供
■可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀
■生物學(xué)或高純度水
■真空泵
■洗板機(jī)
■1-10ul的單道移液器，50-200ul的單道和多道移液器。
■聚丙烯試管
■Parafilm封口膜
■計(jì)時(shí)器
■旋渦混合器

登革熱IgG ELISA試劑盒檢測(cè)步驟

1.陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控和未知血清都必須做雙份檢測(cè)（DENV和NCA共4孔）。按照說明書上的操作流程圖進(jìn)行操作。如果做雙份檢測(cè)的話，96孔板可做22個(gè)樣品。
2.將實(shí)驗(yàn)中使用的板條標(biāo)記好。注意：登革熱抗原（Dengue RA）和質(zhì)控抗原（NCA）已經(jīng)綁定在微孔板中，布局描述如下：
Dengue RA：A-D 行      NCA： E-H 行
3.用試劑盒提供的樣品稀釋液將血清和質(zhì)控品稀釋100倍。用小聚丙烯試管進(jìn)行稀釋，稀釋時(shí)至少需要4ul血清、陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。如：4ul血清加396ul稀釋液。
4.用單道或多道移液器將稀釋好的血清、陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控各50ul加入到相應(yīng)的微孔中。如下為22個(gè)樣品做雙份檢測(cè)時(shí)的示范圖。注意，所有的樣品都必須用DENVRA和NCA檢測(cè)。
5.用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。注意：這樣是為了保證溫度的分布在每個(gè)孔的底部和血緣相等地散播。一旦頂部密封阻礙了蒸發(fā)，任何多余的封板膠必需被剪掉。
6.37℃下保濕溫育板條30分鐘，在溫育器的底部放置水浴箱可達(dá)濕潤(rùn)的作用。注意：不要將微孔板疊放，必須單獨(dú)地分層平輔。這對(duì)于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體，不要讓板條接觸任何濕潤(rùn)的物質(zhì)，如濕紙巾等。
7.溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul 1×的洗滌液。
8.用多道移液器在每一微孔中加入50ul HRP標(biāo)記的酶聯(lián)物。
9.用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）
10.37℃下保濕溫育板條30分鐘。（同步驟6）
11.溫育后，用洗板機(jī)洗板6次。
12.用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。
13.室溫下溫育（無需蓋板）5min。
14.溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。
15.用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。
16.室溫避光溫育10min。
17.溫育后，用多道移液器在每一微孔中加入50ul終止液，室溫溫育1min。
18.溫育后，450nm處測(cè)    OD值。

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