人骨橋蛋白(OPN)酶免試驗(yàn)試劑盒

（日本IBL  27158）

簡介

骨橋蛋白（OPN）來源于骨基質(zhì)，是一種分泌型糖蛋白。目前已發(fā)現(xiàn)多個(gè)細(xì)胞分泌高酸性的鈣結(jié)合的糖基化磷蛋白，包括骨細(xì)胞，腎小管細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，活化的T細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞。分子量的大小取決于其糖基化和磷酸化程度，范圍為66~44kDa

OPN的一個(gè)重要特點(diǎn)是含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列，如纖維蛋白，連蛋白和其他胞外蛋白，通過該序列可與細(xì)胞表面整合素受體結(jié)合，如αvβ3

另一重要特點(diǎn)，由于RNA連接，糖基化，磷酸化，硫酸化和對蛋白酶的敏感度不同，OPN在機(jī)體內(nèi)以多種分子形式存在。OPN和凝血酶同時(shí)存在于受傷，炎癥，血管再生和腫瘤組織位點(diǎn)。OPN易水解，這一過程可能有著重要的生理學(xué)意義。OPN片段的氨基末端含有一個(gè)隱藏的結(jié)合位點(diǎn)，可識別整合素α9β1，而且OPN還含有多個(gè)細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)，與多個(gè)受體反應(yīng)；這些反應(yīng)都有著不同的功能

實(shí)驗(yàn)原理

此試劑盒根據(jù)酶免法的夾心原理，利用兩種不同的高特異性抗體，TMB作為著色劑，顏色強(qiáng)度與人OPN的量成正比

兩種抗體如下：

包被抗體：抗人OPN(O-17)兔IgG，抗體反應(yīng)部分，人OPN的N-端標(biāo)記抗體

HRP標(biāo)記的抗人OPN（10A16）小鼠IgG Fab’， 抗體反應(yīng)部分，人OPN凝血酶裂解位點(diǎn)的右側(cè)

檢測范圍

5~320ng/mL(76.9~4920pg/mL)

預(yù)期用途

僅供研究，不能用于診斷

1. 此試劑盒可用于EDTA-血漿，尿液或細(xì)胞上清中人OPN的體外定量檢測。由于OPN分子是不穩(wěn)定的蛋白，請?jiān)谑褂们皩⑵鋬?chǔ)存于-80℃，放置室溫或反復(fù)凍融會(huì)使檢測值降低

2. 建議EDTA-血漿樣品用EIA緩沖液或PBS5~10倍的稀釋，如果5~10倍的稀釋還是超出了zui高標(biāo)準(zhǔn)品值，則需進(jìn)一步稀釋

3. 血清或肝素血漿樣品的檢測結(jié)果可能不是正確值，因?yàn)镺PN不穩(wěn)定，易被凝血酶裂解，而且OPN分子上有若干個(gè)肝素結(jié)合位點(diǎn)，所以肝素血漿也會(huì)影響試驗(yàn)

4. 建議尿液樣品用EIA緩沖液或PBS200倍稀釋，但各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)*化稀釋率。由于尿液樣品易分解，建議加入PMSF（蛋白酶抑制劑）等。樣品采集后不能立即檢測，應(yīng)貯存于-80℃或更低，避免反復(fù)凍融，否則其檢測值降低。尿液中OPN的量與尿液的體積成反比，建議用肌酸酐補(bǔ)償進(jìn)行檢測

5. 細(xì)胞上清的稀釋比例因細(xì)胞而異，各實(shí)驗(yàn)室以*化稀釋比例稀釋

6. 此試劑盒不能檢測凝血酶裂解的人OPN

7. 重組的和天然的人OPN都可用此試劑盒檢測

試劑盒組成

1. 包被板，96孔，包被有抗人OPN（O-17）兔IgG，親和純化

2. 標(biāo)記抗體濃縮，30X，0.4mlx1，HRP標(biāo)記的抗人OPN（10A16）小鼠IgG Fab’，親和純化

3. 標(biāo)準(zhǔn)品，0.5mlx2，重組人OPN

4. EIA緩沖液，30mlx1，0.05%吐溫20的PBS

5. 標(biāo)記抗體稀釋液，12mlx1,1%BSA，含0.05%吐溫20的PBS

6. 著色劑，15mlx1，TMB底物液

7. 終止液，12mlx1，1N硫酸

8. 洗滌緩沖濃縮液，50mlx1, 40X，含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液