人瘦素超敏酶免試驗（日本IBL27775）

簡介

1950年發(fā)現(xiàn)隱性肥胖基因突變導致肥胖，且與二型糖尿病綜合征的病態(tài)肥胖類似。1994年在洛克菲勒大學團隊發(fā)現(xiàn)肥胖基因編碼形成瘦素。瘦素是由肥胖基因產生的16KDa的分泌型蛋白。脂肪組織產生瘦素并釋放至血液中，隨著脂肪的累積，血液中瘦素的水平含量也呈增長趨勢。瘦素作為lipostat，隨著脂肪組織內脂肪的沉積而增加；它還可作為一激素，指令大腦終止食物的消化和增加活動；還證明了可用于標記和控制青春期的開始；另外，近期研究表明，瘦素可通過中樞神經系統(tǒng)抑制骨形成。

實驗原理

此試劑盒是一種夾心法的ELISA試劑盒，使用了兩種高特異性的抗體。TMB作為顯色劑，zui終溶液所顯示的顏色強度與樣品中瘦素的量成正比

檢測范圍

15.63~1000pg/mL

預期用途

此試劑盒用于人血清，EDTA-血漿和細胞上清中瘦素的定量檢測

重組的和天然的瘦素都可用此試劑盒檢測

試劑盒組成

1. 微孔板，96T，包被有抗人瘦素兔子IgG抗體，親和純化

2. 標記抗體濃縮，30X，0.4ml，HRP標記的抗人瘦素兔IgG Fab片段

3. 標準品，0.5ml，2支，重組人瘦素

4. EIA緩沖液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS

5. 標記抗體稀釋液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS

6. 著色劑，TMB，15ml

7. 終止液，1N硫酸，12ml

8. 洗滌緩沖濃縮液，40X，50ml，0.005%吐溫20的磷酸緩沖液

準備步驟

試驗所需材料但試劑盒未提供

• 酶標儀（450nm）

• 帶刻度的量筒與燒杯

• 孵箱（37℃±1℃）

• 吸水紙

• 稀釋試管

• 微量移液器和取樣吸頭

• 去離子水

• 坐標紙（log/log）

• 用于稀釋標準品的試管

• 洗滌瓶

特別注意

1. 試驗樣品采集后應立即檢測或是凍存，凍存的樣品避免反復凍融，檢測前應在低溫下先將其*溶解混勻

2. 試驗樣品用EIA緩沖液稀釋

3. 試驗樣品和標準品應做雙份檢測

4. 試驗樣品應在中性PH范圍，有機溶劑的污染可能會影響檢測

5. 只能用試劑盒提供的洗滌液洗板，否則會導致試驗失敗

6. 吸水紙上拍干微孔板，不能擦拭

7. TMB底物液應貯存于黑暗處，因其對光敏感，且避免接觸金屬

8. 加入終止液后30min內必須酶標儀讀數(shù)

結果計算

繪制曲線前，所有的數(shù)據都應減去試驗樣品空白值，包括標準品和未知的樣品。以標準品的OD值和濃度在對數(shù)-對數(shù)坐標紙上繪制標準曲線，從標準曲線上可直接讀取未知樣品的濃度

附：采用全自動酶標儀檢測，只需檢測前設置好酶標儀的相關參數(shù)，如坐標參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結果

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