PBS；PBSTween（0．05％）；PBSPBA（PBS加1％BSA），不加疊氮鈉；0．1mol／L碳酸氫鈉緩沖液，pH9．6；鏈霉親和素—過(guò)氧化物酶結(jié)合物；兔抗鼠IgG-過(guò)氧化物酶結(jié)合物；YFPl；生物素標(biāo)記ZO-1抗體；末標(biāo)記的ZO-1抗體；未標(biāo)記的XHl和XH2抗體；未標(biāo)記的對(duì)照單抗PCI0；TMB底物（50mi 50g／L儲(chǔ)存液，5ml 0．1mol幾醋酸鈉pH6．6，lmlH202）。

    2．試驗(yàn)抗體和對(duì)照抗體的活性和滴度測(cè)定

    （1）YFPl儲(chǔ)藏液的制備：用0．1mol／L（pH9．6），碳酸氫鈉緩沖液（或PBS）稀釋YFPl，濃度為20／Ig／ml。加入96孔板中，每孔50弘1，然后室溫2h或413過(guò)夜。

    （2）用PBS-Tween洗板3次。

    （3）于每孔中加入PBS-BSA200~i，室溫孵育1h。

    （4）用PBS-Tween洗板2次。

    （5）在另外一塊96孔板中，準(zhǔn)備一系列滴度（5個(gè)以上的不同稀釋度，均用PBS-BSA稀釋?zhuān)┑臉?biāo)記ZO-1和未標(biāo)記ZO-1、XHl和XH2，以及對(duì)照PCiO抗體。起始濃度一般應(yīng)為10ug／ml，以下每孔用PBS-BSA作10倍稀釋。雜交瘤培養(yǎng)上清可直接使用。   

    （6）將每種滴度的抗體50t~l轉(zhuǎn)移到抗原包被的96孔板中，室溫孵育2h。

    （7）用PBS-Tween洗板4次。

    （8）所有未標(biāo)記的抗體孔中分別加入50ul辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗鼠IgG-結(jié)合物（用PBS-BSA作1：5000的稀釋?zhuān)?；另外，?biāo)記生物素的ZO-1抗體孔中加入鏈霉親合素—過(guò)氧化物酶結(jié)合物（1：5000稀釋?zhuān)?/div>