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競爭分析作圖法實驗原理

閱讀:837          發(fā)布時間:2010-11-24

  確定2種單克隆抗體是否結(jié)合蛋白質(zhì)抗原上同一位點的zui簡便的方法是競爭分析法。該方法可確定一種抗體是否對另一種抗體與某一位點的結(jié)合具有抑制作用。如果兩者相互競爭,說明2種抗體識別相同位點或同一蛋白質(zhì)的空間折疊結(jié)構(gòu)域。相反,如果2種抗體與抗原結(jié)合無相互競爭抑制作用,能夠同時與抗原結(jié)合,說明2種抗體具有不同的特異性,所識別的抗原表位也不同)。  

競爭試驗
 
    競爭分析法對單克隆抗體的特異性分析zui為有用,而多克隆抗血清可識別多種不同的位點,故不宜用此法分析。檢測抗原與抗體間相互競爭結(jié)合試驗的方法較多,但其中至少必須應(yīng)有一種抗體被直接標記,同時對抗體所結(jié)合的抗原經(jīng)過純化。其中ElISA方法zui常用,檢測用的抗體可用生物素化標記(Wagener等1984)。在Wagener的試驗中,主要是為了檢測2個新的單克隆抗體XHl和XH2,與已知的抗YFPl抗體ZO-1競爭結(jié)合目的抗原YFPl。首先,將抗原蛋白質(zhì)YFPl包被96孔酶標板,直接測定以確定所有抗體是否具有活性,并均能與包被抗原進行反應(yīng)。還必須事先測定抗體的滴度,以確定競爭試驗的zui敏感條件。隨后還應(yīng)檢測未標記的抗體XHl、XH2和ZO-1分別與生物素標記的ZO-1競爭性與抗原YFPl結(jié)合的能力。

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