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技術(shù)文章

用抗人抗體包被微珠

閱讀:844          發(fā)布時(shí)間:2011-1-4
[器材和試劑]
● 磁珠(Dynabeads M-450,甲苯磺酰活化,Dynal)
● 硼酸鹽緩沖液(50mmol/L硼酸鈉,pH 9.5)
每 抗人Fc多克隆抗體(免疫純的羊抗人IgG Fc片段特異性抗體,Pierce)
● 磁分離器(Dynal)
● PBS(磷酸鹽緩沖液: 2mmol/L NaH2PO4 H20, 16mmol/L Na2HPO4·2H20, 15mmol/L NaCl)
● PBBS (PBS, 0.1%BSA)
● 硫柳汞(Sigma)
 
[方法]
1.將500ul已充分混懸的磁珠轉(zhuǎn)移到1支Eppendorf管中。將該管置于磁分離儀中,除去液體。
2.將磁珠懸浮于1m1硼酸鹽緩沖液中,混合,再如上除去上清液。
3.將磁珠懸浮在含有75ug抗人Fc特異性多克隆抗體的硼酸鹽緩沖液中,定容到1m1;在轉(zhuǎn)輪上,室溫孵育24h。
4.用磁分離儀去除上清液,將磁珠轉(zhuǎn)移到一個(gè)含10mlPBBS的Falcon管中。4℃旋轉(zhuǎn)洗滌磁珠,10分鐘1次,30分鐘3次,過(guò)夜。每次洗滌后,將含有磁珠的試管插入合適的磁分離儀中除去上清。

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