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技術(shù)文章

細(xì)胞免疫染色復(fù)染

閱讀:829          發(fā)布時(shí)間:2011-3-24
 
    復(fù)染常有助于在細(xì)胞免疫染色中鑒別不同的細(xì)胞類(lèi)型,或者亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。這對(duì)組織切片來(lái)說(shuō)是基本步驟,并可鑒定細(xì)胞的類(lèi)型。也可用于其他染色反應(yīng)。復(fù)染不能使用熒光染料,因其復(fù)染后可產(chǎn)生自發(fā)熒光。為了選擇一種適宜的復(fù)染方法,首先應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞染色試劑是否在乙醇中可溶。
 
    1.不溶于乙醇的方法
    (1)用水輕輕洗滌標(biāo)本片;
    (2)加數(shù)滴Harris蘇木精(商品化試劑)于標(biāo)本中,孵育約5min。染色時(shí)間的長(zhǎng)短決定染色的強(qiáng)度;
    (3)用水輕輕洗滌;
    (4)用0.5%冰乙酸/99.5%乙醇處理標(biāo)本片大約10rain;
    (5)用水輕輕洗滌;
    (6)用DPX封片。
 
    2.溶于乙醇的方法
    (1)用水輕輕洗滌標(biāo)本片;
    (2)加數(shù)滴Mayer蘇木精(商品化試劑)至標(biāo)本片,孵育大約5min,染色時(shí)間的長(zhǎng)短決定染色的強(qiáng)度;
    (3)用水輕輕洗滌;
    (4)用30mm01/L氫氧化銨重復(fù)處理標(biāo)本片
    (5)用水輕輕洗滌;
    (6)用Gelvat01或MOWi。1封片。

復(fù)染
推薦用法
需準(zhǔn)備試齊
優(yōu)    點(diǎn)
缺    點(diǎn)
蘇木精
可用于黑色或棕色染料;用于核或細(xì)胞質(zhì)抗原染色
可購(gòu)買(mǎi)
可保存的信息量大;核大
染色很暗,不適合弱抗原信號(hào)的顯示
甲基綠
可用黑色或棕色染色,用于核抗原染色
貯存液二1%甲基綠溶于100mmol/L    酸鈉(pH5.5);工作液為0.1%
染色淺,適用于弱抗原信號(hào),胞質(zhì)大
獲得的組織或細(xì)胞精細(xì)資料有限
堅(jiān)固紅
用于藍(lán)色染色或LacZ檢測(cè),可用于核或細(xì)胞質(zhì)抗原染色
可購(gòu)買(mǎi)
 
著色很淺,獲得的組織或細(xì)胞精細(xì)資料有限

 

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