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表皮生長因子(EGF)的測定方法
閱讀:2156 發(fā)布時間:2011-12-17EGF主要來源于頒下腺。成年人許多組織中也表達EGF。人成纖維細胞、唾液腺癌細胞等也可產生EGF。EGF的作用沒有種屬特異性,人和小鼠的EGF對人成纖維細胞的作用相同。
1.Swiss 3T3細胞增殖法
(1)用含5%FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss 3T3細胞調整成1×104/mL,接種于60mm的培養(yǎng)皿中(5mL),置37C 5%C02溫箱中培養(yǎng)4~5d,待細胞匯合后,更換上述培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)2~3d,此時細胞數不再增多。
(2)分別加入200ral系列稀釋的待測樣品或標準品,陰性對照加培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)4d。
(3)采用3H-TdR摻人法或比色法測定細胞增殖反應。根據標準曲線計算待測樣品中EGF的含量(活性),或用誘導50%zui大細胞增殖的zui高稀釋度表達EGF的含量。
2.BALB/c 3T3細胞增殖法
(1)用含5%FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss 3T3細胞調整成2×104/mL,接種于60mm的培養(yǎng)皿中(5mI),置37C 5%C02溫箱中培養(yǎng)5ho更換同樣培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)24h。
(2)向培養(yǎng)物中加入100~L系列稀釋的待測樣品或標準品,陰性對照培養(yǎng)皿加培養(yǎng)液,培養(yǎng)16h后,同上法測定和計算EGF的含量(活性)。