應(yīng)用PAP法顯示抗原含量較多的組織或冰凍切片抗原保存良好的標(biāo)本時，可導(dǎo)致陰性結(jié)果。Bigbee（1977）的研究證實，陰性結(jié)果是由于*抗體用量過高，與組織抗原結(jié)合過多，使相鄰兩個抗體的Fc段間的距離恰好是連接抗體的兩個Fab段結(jié)合的長度，于是連接抗體不存在游離Fab段，僅存無活性的Fc段，所以不能將PAP復(fù)合物連接在與組織抗原結(jié)合的*抗體上，導(dǎo)致陰性結(jié)果。尤其是冰凍切，而石蠟切片很少發(fā)生這種現(xiàn)象。克服的辦法是將*抗體盡量稀釋。

 

    2．橋抗體

 

    也稱連接抗體。它的兩個Fab段具有相同的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及與抗原結(jié)合的能力，因此，當(dāng)*抗體和PAP復(fù)合中抗HRP抗體來自同一種屬動物時，橋抗體能同時與上述二種抗體結(jié)合，起到橋的作用。為了確保橋抗體的二個Fab段之一與*抗體結(jié)合，另一個與抗HRP抗體結(jié)合，橋抗體的濃度必須高于常規(guī)用的第二抗體。

 

    3．PAP復(fù)合物

 

在PAP法和酶橋法中，特別強調(diào)*抗體和抗HRP必須來自同一種屬，橋抗體才能發(fā)揮橋的作用，將其連接在一起。