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炭疽桿菌保守基因的特征及其應(yīng)用

閱讀:466          發(fā)布時間:2010-12-9

保守基因序列的特異性是不同微生物種屬的重要標志,如核糖體RNA、rpoB基因、gyrB基因等。核糖體RNA基因具有較高的保守性,其微小變異為微生物的分類和鑒定提供了相關(guān)依據(jù)。蠟狀芽孢桿菌屬不同桿菌間16SRNA、23SRNA序列高度相似,不能充分反映炭疽桿菌和其他桿菌間的差異。

 
    rpoB是RNA聚合酶p亞單位編碼基因,具有較高的保守性,不同桿菌的rpoB序列特征比較一致,炭疽桿菌rpoB基因至少存在4個穩(wěn)定的變異位點。在研究早期,Patra等發(fā)現(xiàn)炭疽桿菌基因組特異性序列BA813(位于rpoB內(nèi)部)能夠區(qū)分炭疽桿菌和其他桿菌,可以用于分子診斷。根據(jù)變異位點序列特征,Qi等成功地設(shè)計了FRET熒光探針實時定量PCR檢測體系。Levine等利用該序列成功檢測出福爾馬林固定組織的炭疽桿菌。但也有人報道,利用BA813序列設(shè)計的檢測體系與其他桿菌存在交叉反應(yīng)。
 
    gyrB基因是DNA拓撲酶U(topoisomeraseⅡ)的ATP酶區(qū)域的編碼序列,長約2kb。通過序列比較和DNA雜交發(fā)現(xiàn),炭疽桿菌gyrB基因序列比16SrRNA更加具有自身特點,可以作為診斷標志性序列。這些高度保守基因序列基本一致,但少數(shù)位點上存在穩(wěn)定變異。因此,利用這些序列作為炭疽桿菌檢測的標志,對檢測引物或探針的設(shè)計要求比較嚴格,同時也增加了出現(xiàn)假陽性結(jié)果的可能。此外,16-23SRNAs及拓撲異構(gòu)酶A、拓撲異構(gòu)酶B亞單位編碼基因間隔序列分析,對于診斷和鑒定炭疽桿菌亦有重要價值。
 

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