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炭疽的病原學(xué)

閱讀:300          發(fā)布時間:2010-12-9

 1.炭疽桿菌
    炭疽桿菌是一種zui大的致病菌,長5~10um,寬1~3um。它有莢膜、無鞭毛,無運(yùn)動性,革蘭染色陽性,是一種需氧菌或兼性厭氧菌。它在動物體內(nèi)呈單鏈狀或形成短鏈,不形成芽孢,可以形成莢膜;在培養(yǎng)物中則形成長鏈,菌體兩端平切,竹節(jié)狀。
    在外界不良環(huán)境條件下可形成芽孢,圓形或卵圓形,位于菌體中央或稍向一端。在普通瓊脂平板上長成灰白色、不透明、扁平、表面粗糙、邊緣不整的菌落,低倍顯微鏡下觀察呈卷發(fā)狀。該菌分解葡萄糖、麥芽糖,產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,液化明膠。穿刺培養(yǎng)時,菌落沿穿刺線向周圍伸延,表層較長,管底較短,呈倒立的松樹狀。
    以前通常認(rèn)為炭疽桿菌無鞭毛,但梁旭東通過半固體擴(kuò)散生長法研究國內(nèi)炭疽桿菌(Bacillusanthracis),發(fā)現(xiàn)受試菌株中90%.以上具有鞭毛,并經(jīng)各種經(jīng)典方法和分子生物學(xué)方法證實(shí)了這一結(jié)果,提示具有鞭毛是國內(nèi)分離的炭疽桿菌的一種特征,且不排除國外分離的炭疽桿菌也具有鞭毛的可能性。這一發(fā)現(xiàn)無疑對炭疽桿菌的研究提出了新的問題,說明炭疽菌是集芽孢、莢膜、鞭毛、菌毛于一體的細(xì)菌之一,是很好的細(xì)菌研究模型。
    目前已知炭疽桿菌可產(chǎn)生4種抗原,即保護(hù)性抗原、莢膜抗原、菌體抗原與芽孢抗原。保護(hù)性抗原是炭疽桿菌在生活過程中產(chǎn)生的一種細(xì)胞外蛋白質(zhì)成分,為炭疽桿菌毒素的組成部分,具有免疫原性,能保護(hù)動物抵抗本菌的感染,但只能使炭疽感染者獲得短暫的免疫力;莢膜抗原是由D—谷氨酸多肽組成的與毒力有關(guān)的一種抗原,當(dāng)產(chǎn)生莢膜的能力失去后,其毒力隨之消失,值得注意的是,莢膜抗原所產(chǎn)生的抗體在動物體內(nèi)并無保護(hù)作用;菌體抗原為多糖類物質(zhì),其特點(diǎn)是耐熱、抗腐敗、性質(zhì)穩(wěn)定,因此在腐敗尸體中經(jīng)較長時間或加熱煮沸后也不受破壞,仍可與特異性免疫血清發(fā)生沉淀反應(yīng),但與毒力無關(guān);另外研究發(fā)現(xiàn)炭疽桿菌的芽孢的外膜含有抗原決定簇,此抗原具有免疫原性及血清學(xué)診斷價值。

    2.炭疽桿菌基因組
    炭疽桿菌的致病性與其表達(dá)的特異性蛋白PA、LF和EF有關(guān),其傳染性和適應(yīng)逆境的能力與其莢膜形成有關(guān),這些特異性表型特征取決于主基因組及2個特異性質(zhì)粒(pX01和pX02)。炭疽桿菌主基因組上有關(guān)基因與其正常的生命活動有關(guān),包括蛋白質(zhì)的合成、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等,而編碼致病毒素的基因pagA、lef和cya位于pX01質(zhì)粒上,與芽孢形成有關(guān)的基因(如capA、capB、capC等)則位于pX02質(zhì)粒上。基因組的完整性是炭疽桿菌致病性和芽孢形成的必要前提。環(huán)境誘導(dǎo)和復(fù)制錯誤導(dǎo)致基因發(fā)生變化,包括堿基的缺失、插人等各種突變甚至質(zhì)粒的丟失,這些因素是新病原體形成的原因,也反映了不同菌株之間的親緣關(guān)系和單株特征。不同微生物基因序列的差異是菌株分類和鑒定的分子基礎(chǔ),而DNA指紋圖譜、*特異序列以及高度保守序列多態(tài)性等反映了炭疽桿菌的基因特征,也為臨床基因診斷提供了可靠依據(jù)。
    炭疽桿菌基因組組成:炭疽桿菌基因組分為主基因組和質(zhì)粒兩部分,質(zhì)粒包括pX01質(zhì)粒和pX02質(zhì)粒。
    (1)主基因組  炭疽桿菌的大多數(shù)生命活動所需要的基因都位于主基因組上,主基因組為巨大的環(huán)形雙鏈DNA,其長度為5227293bp,共有5508個開放閱讀框(ORF),已知功能基因序列約占50%,保守基因序列約占22%,理論推測基因序列約占16%,未知功能基因序列約占12%。其中對疫苗設(shè)計(jì)可能有意義的ORF約240個,而與表面抗原形成有關(guān)的ORF約為20個,包括SAP、EA1蛋白基因以及相關(guān)酶類(如乙醛脫氫酶等)基因。此外,基因組中還具有炭疽特異的數(shù)目變異的串連重復(fù)區(qū)和高度保守的RNA聚合酶基因等。   
    (2)質(zhì)粒pX01  炭疽桿菌的強(qiáng)致病性取決于pX01質(zhì)粒,該質(zhì)粒長181.6kb。編碼致病因子EF、LF和PA的基因pagA、lef和cya均位于該質(zhì)粒上,并與毒素調(diào)節(jié)因子基因actzA、pagR等一起組成44.8kb的毒力島(pathogeni cityisland),而毒力島的兩端則為拷貝數(shù)相近的相互倒置的ISl627元件。該質(zhì)粒上共存在217個ORF,包括topA以及與啟動質(zhì)粒復(fù)制、維持質(zhì)粒穩(wěn)定相關(guān)的基因。
    (3)質(zhì)粒pX02  pX02質(zhì)粒與炭疽桿菌莢膜的形成有關(guān),共長94.8kb。參與多聚2D2谷氨酸莢膜合成的CAP元件,由3個順反子capB、capC和capA組成,這3個順反子從各自起始轉(zhuǎn)錄區(qū)按照同一方向轉(zhuǎn)錄,形成連續(xù)的3個ORF,共3244個堿基。在CAP元件的下游存在一個1401bp的ORF,編碼dep蛋白,該基因編碼蛋白可能參與莢膜大分子的降解,與小分子的多聚2D2谷氨酸形成有關(guān)。此外,該質(zhì)粒還有capA等調(diào)節(jié)基因。

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