免疫酶染色試驗

 

    用酶標抗體直接檢測病豬組織中的病毒抗原。感染豬瘟的腎臟皮質(zhì)部細胞被染成深褐色。應用內(nèi)含o．01％過氧化氫或o．01％疊氮鈉溶液的抑制內(nèi)源性酶，取得較好效果

。

    采病豬扁桃體、脾、腎、淋巴結(jié)等病樣做壓印片或冰凍切片，標本自然干燥后，在2％戊二醛和甲醛等量混合液中固定10rnin。干燥后，將標本浸入0．01％過氧化氫或0．01％疊氮鈉溶液的Tris-HCI緩沖液中，室溫下作用30rain。用pHL 40．02mol／L磷酸鹽緩沖液漂洗5次，每次3min，然后風干。將標本置于濕盒內(nèi)，滴加1：10酶標記抗體，37~C下3min：用pH 7．40。02mol／L磷酸鹽緩沖液沖洗3～4次，每次2～3min，再用無水乙醇、二甲苯脫水，封片檢查。結(jié)果判定：用顯微鏡檢查，如細胞呈深褐色為陽性；黃色或五色則為陰性。豬瘟兔化弱毒接種的豬組織細胞漿呈微褐色，與強毒株感染有明顯區(qū)別。

 

    免疫熒光試驗 

 

    可分為直接免疫熒光和間接免疫熒光試驗。

 

    組織直接免疫熒光試驗  采集病變典型的可疑組織或臟器，用石蠟包埋后切片或冷凍后用冰凍切片機切成薄片，室溫下用丙酮固定lOmin并風干組織片，之后用PBS沖洗組織片，抗體孵育（間接熒光分兩步進行，直接熒光為一步），PBS再次沖洗組織片，風干后在熒光顯微鏡下觀察熒光染色結(jié)果。該方法優(yōu)點：不需采集大量病變實質(zhì)組織，操作簡單。缺點：特異性和敏感性低，主觀性強。

 

    間接免疫熒光試驗  在病豬組織上滴加1：4抗豬瘟陽性血清，作用30mln后洗滌再加羊抗豬IgG熒光抗體，作用30min后，漂洗、干燥、鏡檢。優(yōu)點：操作簡便，診斷迅速。缺點：成本昂貴，特異性差，主觀性強，需有經(jīng)驗的檢驗員操作，以區(qū)分好非特異性染色。