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公司動(dòng)態(tài)

藻紅蛋白作為熒光標(biāo)記物具有的優(yōu)點(diǎn)

閱讀:2900          發(fā)布時(shí)間:2011-1-8
 
    藻紅蛋白或稱藻膽蛋白是一種來(lái)源于藻青菌(Cyanobacteria)和真核菌類相當(dāng)穩(wěn)定的具有很強(qiáng)溶解性的熒光蛋白。這些蛋白質(zhì)含有共價(jià)連接的四吡咯基團(tuán)(tetrapyrolegroup),其生物學(xué)作用是聚集光,通過(guò)熒光共振能源傳遞轉(zhuǎn)化成一對(duì)特殊的葉綠素分子,定位在光合反應(yīng)中心。
 
    因?yàn)榫哂泄馐占δ?,藻紅蛋白的光吸收和發(fā)射熒光zui大,而內(nèi)部能量傳遞或外界pH值或離子組成對(duì)熒光猝滅影響降低到zui小。藻紅蛋白利用共價(jià)鍵結(jié)合的形式與抗體免疫球蛋白或其他蛋白質(zhì)結(jié)合,形成穩(wěn)定的復(fù)合。
 
    應(yīng)用其復(fù)合物進(jìn)行免疫熒光組織化學(xué)、流式細(xì)胞儀和FISH的檢測(cè),對(duì)抗原或DNA、RNA進(jìn)行定量和定性分析,也是雙重標(biāo)記或多重標(biāo)記的熒光蛋白。
 
    藻紅蛋白作為熒光標(biāo)記物具有以下優(yōu)點(diǎn)。
    ①具有強(qiáng)的長(zhǎng)波長(zhǎng)激發(fā)和發(fā)射熒光,可避免來(lái)自其他生物材料熒光的干擾;
    ②Stokes移位相當(dāng)大,具*的發(fā)射量子產(chǎn)率;
    ③熒光不被外部試劑猝滅,通過(guò)與蛋白質(zhì)主鏈的共價(jià)結(jié)合, 熒光基團(tuán)可被保護(hù).
    ④具有非常高的水溶性;
    ⑤有明確分子質(zhì)量的齊性結(jié)構(gòu)(homogeneousstructure);
    ⑥與許多生物學(xué)或合成材料的多位點(diǎn)穩(wěn)定交聯(lián)。
    藻紅蛋白可分為D—藻紅蛋白(phycoerythin B;B-PE)、R—藻紅蛋白(R-PE)和異位(或別)藻藍(lán)蛋白(allophycocyamin;APC)。
 
    (一)藻紅蛋白的光譜特點(diǎn)
    各型藻紅蛋白的光量子產(chǎn)率高達(dá)o.98,消光系數(shù)高達(dá)2.4X106cm-1·m01.L-1。以lmol為基準(zhǔn),在可比較的波長(zhǎng),熒光產(chǎn)率等于至少30個(gè)未猝滅的熒光黃分子或100個(gè)羅丹明分子的熒光產(chǎn)率。
    (二)藻紅蛋白的應(yīng)用
 
    各型藻紅蛋白均有商品化產(chǎn)品,例如二抗標(biāo)記的B-PE、R-PE和APC,生物素化的B—PE、R-PE和APC,親和素標(biāo)記的B-PE、R-PE和APC產(chǎn)品。其敏感性APCzui高,其結(jié)合物的穩(wěn)定性B-PE比R-PE更好,但R-PE結(jié)合物的穩(wěn)定性可通過(guò)加入1—丙基沒(méi)食子酸鹽(propyl gallate)而增強(qiáng)??膳c其他綠色熒光素標(biāo)記物進(jìn)行雙重免疫熒光組化標(biāo)記。

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