1．應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)蠟樣芽孢桿菌

    王振國(guó)、劉金華等利用PCR技術(shù)檢測(cè)致病性蠟樣芽孢桿菌，對(duì)致病性蠟樣芽孢桿菌溶血素hblA基因序列進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物，通過優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，來實(shí)現(xiàn)對(duì)致病蠟樣芽孢桿菌的快速檢測(cè)，結(jié)果是該方法具有較強(qiáng)的靈敏性及特異性，能夠?qū)δc毒素型蠟樣芽孢桿菌進(jìn)行有效的檢測(cè)，其zui低檢出限可達(dá)9CFU／m1，用PCR技術(shù)對(duì)食物樣品中致病性蠟樣芽孢桿菌的檢測(cè)取得與普通生化檢測(cè)方法一致的結(jié)果。結(jié)果證明利用PCR技術(shù)對(duì)食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測(cè)較常規(guī)的生化檢測(cè)方法具有省時(shí)省力的特點(diǎn)且靈敏性較高，具有較強(qiáng)的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值

 

    胡玉山、江麗芳、洪幫興等運(yùn)用UP-PCR技術(shù)進(jìn)行食源性感染常見致病菌Hsp60基因的擴(kuò)增與酶切鑒定，采用UP-PCR法擴(kuò)增其Hsp60基因，并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切鑒定分析。結(jié)果對(duì)13種食源性感染常見致病菌均可以擴(kuò)增出約1．1kb的基因片段，蠟樣芽孢桿菌PCR產(chǎn)物經(jīng)HindⅢ酶切后形成約684bp和470bp片段，小腸結(jié)腸炎耶爾森菌PCR產(chǎn)物經(jīng)BglⅡ酶切后形成861bp和296bp片段。

 

    王振國(guó)、劉金華、徐寶梁等應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)致病性蠟樣芽孢桿菌，他們利用SYBRGeen工染料能與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光的特點(diǎn)，建立了一種用來檢測(cè)致病性蠟樣芽孢桿菌（兄cereus）的實(shí)時(shí)PCR。該方法對(duì)致病性蠟樣芽孢桿菌致病相關(guān)基因cereolysisAB基因序列進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)1對(duì)特異引物，通過對(duì)SYBRGeenI實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)對(duì)致病性蠟樣芽孢桿菌的檢測(cè)。結(jié)果是該方法具有較強(qiáng)的靈敏性及特異性，能夠?qū)χ虏⌒韵灅友挎邨U菌進(jìn)行有效檢測(cè)，其zui低檢出限可達(dá)8CFU／ml。利用該技術(shù)檢測(cè)蠟樣芽孢桿菌，較常規(guī)的生化檢測(cè)方法具有省時(shí)省力的特點(diǎn)，且靈敏性較高，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

 

    2．應(yīng)用寡核苷酸芯片技術(shù)檢測(cè)蠟樣芽孢桿菌

    洪幫興、江麗芳、胡玉山等應(yīng)用寡核苷酸芯片技術(shù)檢測(cè)食源性感染常見致病菌。方法為利用帶正電荷尼龍膜為芯片載體，合成寡核苷酸探針，點(diǎn)樣于載體制成寡核苷酸芯片，對(duì)食源性感染常見致病菌23SrDNA基因片段擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交檢測(cè)。結(jié)果表明在同一條件下運(yùn)用設(shè)計(jì)的通用引物擴(kuò)增出16種（屬）細(xì)菌23SrDNA基因片段。大腸埃希菌、沙門菌、志賀菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、變形桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、蠟樣芽孢桿菌、肉毒梭菌和空腸彎曲菌等10種（屬）菌雜交結(jié)果顯示具有高靈敏度和特異性；金黃色葡萄球菌、鏈球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌等4種（屬）菌，未能顯示預(yù)期的種（屬）雜交結(jié)果；而應(yīng)用食源性感染模擬標(biāo)本，檢測(cè)肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌這兩種與食源性感染無關(guān)的致病菌時(shí)未與芯片上探針出現(xiàn)雜交反應(yīng)，檢出水平可達(dá)10CFU／m1。建立的寡核苷酸芯片技術(shù)在食源性感染常見致病菌的檢測(cè)上快速準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，為食源性感染的診治與預(yù)防提供了有效的技術(shù)手段和方法依據(jù)。