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夾心ELISA檢測與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素
閱讀:528 發(fā)布時(shí)間:2011-1-19此法的包被物可用抗LT抗體或LT受體成分(GM神經(jīng)節(jié)背脂)兩種。試驗(yàn)時(shí),先用1:5O稀釋的粗制兔抗LT血清或5O/lg/ml GM神經(jīng)節(jié)背脂包被塑料板。包被后,加入待檢菌的37℃振搖培養(yǎng)18h的腦心浸液培養(yǎng)物濾液2OOμL,每份樣品平行加2孔,按常法溫育,洗滌后,加1:500稀釋的粗制羊抗LT血清,孵育,洗滌,再加1:4OO的兔抗羊IgG堿性磷酸酶復(fù)合物,以六水合物(hexahydrate)作底物顯色,測OD450值,以O(shè)D450≥0.2O判為陽性。據(jù)Klipstein等報(bào)道,此法若以粗制LT血清為固相,其檢測靈敏度為185pg/ml的LT;以GM作固相,則可檢出290pg/m1,且無假陽性。
除上法外,有人已報(bào)道用GMl競爭·ETISA檢測LT;也有報(bào)道用雙夾心ELISA,可用于檢測和定量豬源LT。