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結核分子藥敏試驗與NAT2基因型分析
閱讀：982 發(fā)布時間：2011-1-19目前已闡明了部分MT耐藥的分子機制，發(fā)現(xiàn)耐利福平（RFP）是由于其靶分子RNA聚合酶p亞單位的編碼基因rpoB突變所致；耐異煙肼（1NH）與過氧化物酶的編碼基因katG或烯?；€原酶編碼基因inhA操縱子或烷基過氧化氫酶編碼基因ahpC操縱子或9-?；；d體蛋白合成酶編碼基因kasA改變有關；耐吡嗪酰胺（PZA）是由于其吡嗪酰胺酶編碼基因pncA突變所致；耐乙胺丁醇（EMB）與阿拉伯糖基轉移酶的編碼基因embABC操縱子突變有關；耐鏈霉素（SM）是由于其核糖體蛋白S12編碼基因rpsL和16SrRNA編碼基因rrs突變所致；耐喹諾酮類藥物主要是由于其DNA旋轉酶A亞單位編碼基因gyrA或B亞單位編碼基因gyrB突變所致。因此，應用各種基因突變分析技術檢測耐藥基因突變，即可檢出耐藥的MT。但約5％～40％的耐藥分離株未能檢測出耐藥基因突變，說明還存在其他的耐藥機制有待研究。其他抗結核藥物（如環(huán)絲氨酸D、大環(huán)內酯類藥物、乙硫異煙胺等）的耐藥分子機制尚在研究之中。
①PCR-SSCP技術。通過與野生型標準株對照，可確定野生型和突變型基因。該方法簡便、快速，但不能確定突變的部位和性質。
②PCR-RFLP技術。具有較高的特異性，但只能用于分析已知序列特定位點的基因突變。目前主要應用限制性內切酶MboⅡ分析rpsL基因43位密碼子突變；應用NlaⅢ和HaeⅢ分析embB基因306位密碼子突變；應用Ncil分析katG基因463位密碼子多態(tài)性。
③PCR-直接測序法。能夠確定突變的部位與性質，是檢測基因突變的決ㄐ苑椒?，但需DNA測序儀，費用較高，難以在臨床普遍開展。
④單鏈探針反向雜交試驗。是應用生物素修飾的特異引物擴增DNA，將PCR產(chǎn)物變性后與固定在一張膜上的特異寡核苷酸探針雜交，通過酶免疫顯色法顯示結果。Innogenetics公司根據(jù)該原理推出了INNO-LiPA Rif。MT檢測試劑盒及配套的自動檢測儀（Auto-LIPA）用于檢測MT的耐RFP基因型。
⑤PCR-基因芯片分析法。該方法簡便、快速，是發(fā)展的趨勢。
N2乙酰轉移酶2（NAT2）基因型分析 NAT2主要是負責INH代謝，NAT2的表型或基因型不同INH清除率也不同。因此，在治療前，通過分析NAT2基因型可評價患者對藥物肝毒副作用的敏感性。目前全軍結核病中心正在進行該方面的研究