化工儀器網(wǎng)
公司動(dòng)態(tài)
細(xì)胞因子的生物活性檢測(cè)
閱讀：2287 發(fā)布時(shí)間：2010-5-21、促進(jìn)細(xì)胞增殖和增殖抑制法:目前已建立的應(yīng)用依賴(lài)細(xì)胞株檢測(cè)各種細(xì)胞因子的方法，其操作過(guò)程基本相同。檢測(cè)細(xì)胞因子促生長(zhǎng)活性或抑制生長(zhǎng)活性是將不同稀釋度的待測(cè)樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品與培養(yǎng)的細(xì)胞株共同培養(yǎng)一定時(shí)間，然后檢測(cè)增殖的細(xì)胞數(shù)。前者的增殖細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞因子的含量成正比，而后者的增殖細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞因子的含量成反比。常用的檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法有3H-TdR摻入法、比色法、染色法和直接計(jì)數(shù)法等。其中測(cè)定細(xì)胞代謝酶反應(yīng)細(xì)胞增殖數(shù)的比色法包括 MTT、XTT、MTS和NAG等方法，可在酶標(biāo)檢測(cè)儀上自動(dòng)化檢測(cè)，且不接觸同位素，較為常用。此外，測(cè)定代謝產(chǎn)物熒光強(qiáng)度的方法也可檢測(cè)增殖細(xì)胞數(shù)，如ATP法和cAMP法。細(xì)胞因子還能誘導(dǎo)靶細(xì)胞表達(dá)某些表面分子或分泌一些蛋白質(zhì)，可以用熒光素標(biāo)記抗體檢測(cè)表達(dá)相應(yīng)分子的細(xì)胞數(shù)，或用特定方法測(cè)定細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)，間接了解細(xì)胞因子的活性。
各種集落刺激因子（CSF）作用于造血系統(tǒng)的不同細(xì)胞，可促進(jìn)其增殖及在半固體瓊脂凝膠系統(tǒng)中克隆培養(yǎng)骨髓細(xì)胞的集落形成，故可采用集落形成試驗(yàn)研究CSF的水平。
2、細(xì)胞毒活性測(cè)定法: 許多細(xì)胞因子針對(duì)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞及病毒感染的細(xì)胞具有溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的活性。檢測(cè)細(xì)胞因子溶細(xì)胞/細(xì)胞毒活性或抑制生長(zhǎng)活性是將不同稀釋度的待測(cè)樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品與培養(yǎng)的細(xì)胞株共同培養(yǎng)一定時(shí)間，然后檢測(cè)存活的靶細(xì)胞數(shù)，并與對(duì)照比較求得溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的百分率，或以O(shè)D值對(duì)樣品稀釋度作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線，從曲線上求得引起相應(yīng)反應(yīng)的待測(cè)樣品的含量。檢測(cè)活靶細(xì)胞數(shù)的方法同促細(xì)胞增殖法。
3、抗病毒活性測(cè)定法：檢測(cè)樣品中干擾素的含量zui常用的方法是檢測(cè)其抗病毒活性，其檢測(cè)原理是用細(xì)胞因子樣品處理易感細(xì)胞，使細(xì)胞建立抗病毒狀態(tài)，然后用適量病毒攻擊細(xì)胞，評(píng)價(jià)病毒的復(fù)制量或病毒引起細(xì)胞病變的程度即可判斷樣品中細(xì)胞因子的生物活性。常用于檢測(cè)抗病毒活性的細(xì)胞株有WISH，Hep2/c，L929，A549和MDBK等。其中WISH和Hep2/c細(xì)胞株用以檢測(cè)人干擾素，L929細(xì)胞株用于檢測(cè)小鼠干擾素，Ratec細(xì)胞株用于檢測(cè)大鼠干擾素，而MDBK細(xì)胞株則可用于檢測(cè)多種族的IFN-α和IFN-γ。常用于攻擊細(xì)胞的病毒有濾泡性口炎病毒（VSV）、鼠腦心肌炎病毒（EMCV）以及Sindbis virus等病毒。檢測(cè)抗病毒活性的具體方法包括測(cè)定細(xì)胞因子抑制病毒的致細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）、抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒的產(chǎn)量等。 IFN的抗病毒活性通常以每毫升樣品中所含的單位數(shù)（U/ml）表達(dá)，IFN的純度則以每毫克蛋白質(zhì)中所含的單位數(shù)（U/mg）或IFN的量（μg/mg）表達(dá)。IFN抗病毒活性單位的定義是指能抑制50％細(xì)胞病變或50％病毒空斑形成效應(yīng)的IFNzui高稀釋度的倒數(shù)。
4、趨化活性測(cè)定法: 多種細(xì)胞因子具有趨化活性，分別能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等定向遷移。趨化因子誘導(dǎo)細(xì)胞移動(dòng)的方式包括趨化性和化學(xué)增活現(xiàn)象。趨化性（chemotaxis）是指誘導(dǎo)細(xì)胞向趨化因子化學(xué)濃度高的方向作定向移動(dòng)，可采用瓊脂糖和微孔小室趨化試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞因子的趨化活性；化學(xué)增活現(xiàn)象（chemokinesis）是指增強(qiáng)細(xì)胞的隨機(jī)運(yùn)動(dòng)，可采用瓊脂糖小滴化學(xué)動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)。