大家都知道，在細(xì)胞凋亡的早期，線粒體膜電位的下降是一個(gè)標(biāo)志性的事件。而對(duì)于線粒體膜電位的檢測(cè)，JC-1這種親脂性陽(yáng)離子染料是個(gè)很好的工具，也使用了很多年。生物通 www.ebiotrade。。ｃｏｍ 
當(dāng)線粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，產(chǎn)生紅色熒光；而當(dāng)線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體，產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以很方便地通過(guò)熒光顏色的轉(zhuǎn)變來(lái)檢測(cè)線粒體膜電位的變化。人們常用紅綠熒光的相對(duì)比例來(lái)衡量線粒體膜去極化的程度。
對(duì)于傳統(tǒng)的JC-1檢測(cè)，在使用帶有單個(gè)488 nm（藍(lán)色）激光器的流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析時(shí)，JC-1單體和JC-1聚合物這兩個(gè)檢測(cè)通道需要熒光補(bǔ)償。在今年4月發(fā)表于《Current Protocols in Cytometry》的一篇文章中，意大利摩德納大學(xué)的Sara De Biasi等人對(duì)此方法進(jìn)行了改進(jìn)。他們使用的是賽默飛世爾的Attune? NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀。生物通 www.ebiotrade。。ｃｏｍ 
這種儀器采用模塊化設(shè)計(jì)，配有紅、黃、藍(lán)、紫四個(gè)激光器。作者認(rèn)為，多激光器的使用能zui大限度減少熒光補(bǔ)償?shù)男枰瑥亩兄趯?shí)現(xiàn)更輕松、更的檢測(cè)。同時(shí)，多激光器的激發(fā)也讓作者能夠檢測(cè)其他的凋亡標(biāo)志物，如PS外翻和活性氧簇的形成。
在這項(xiàng)研究中，De Biasi及其同事使用兩個(gè)激光器來(lái)檢測(cè)JC-1：藍(lán)色（488 nm）激光器來(lái)激發(fā)JC-1的單體，而黃色（561 nm）激光器來(lái)激發(fā)JC-1聚合物。他們利用纈氨霉素（valinomycin）處理U937細(xì)胞后，開展JC-1染色。在使用單色激光激發(fā)時(shí)，不使用補(bǔ)償就無(wú)法輕松分開JC-1的單體和聚合物；不過(guò)，在使用雙色激光激發(fā)時(shí)，就不需要熒光補(bǔ)償。生物通 www.ebiotrade。。ｃｏｍ 
在同時(shí)檢測(cè)多個(gè)凋亡標(biāo)志物時(shí)，作者利用兩種額外的探針：Pacific Blue? annexin V檢測(cè)磷脂酰絲氨酸的暴露（紫色激光），而CellROX? Deep Red試劑檢測(cè)活性氧簇（紅色激光）。同時(shí)使用Attune? NxT流式細(xì)胞儀上的四個(gè)激光器，作者證明了三種凋亡標(biāo)志物的檢測(cè)。他們認(rèn)為，這些方案適用于凋亡的多參數(shù)檢測(cè)。