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巨細(xì)胞病毒抗體IgM（CMVAb-IgM）檢測
閱讀：642 發(fā)布時間：2010-8-10
巨細(xì)胞病毒抗體IgM（CMVAb-IgM）檢測
[測定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔表面包被純化的巨細(xì)胞病毒抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在巨細(xì)胞病毒抗體—IgM可與微孔上抗原相結(jié)合。然后洗去未結(jié)合物質(zhì)，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗去過量的酶聯(lián)液。zui后加入底物和色原（顯色液）。在特定時間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng)。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中巨細(xì)胞病毒抗體-IgM含量呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀與校正和對照相比，讀出結(jié)果。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．微孔板
2．樣品稀釋液
3．HRP-抗人IgM酶結(jié)合物
4．陰性對照
5．陽性對照
6．洗滌劑
7．TMB顯色液
8．終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[測定步驟]
1．吸取10ul血清標(biāo)本加入25091標(biāo)本稀釋液中，做1：26稀釋。
2．吸取100ul稀釋過的血清、陽性對照、陰性對照和校正液（不稀釋），加入微孔板內(nèi)，設(shè)空白對照1孔。振蕩，混勻，去除孔內(nèi)液體中氣泡，室溫環(huán)境中孵育20min。
3．棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗5次。
4．每孔再加入100~1酶聯(lián)結(jié)合物，室溫環(huán)境中孵育20min。
5．棄去孔中酶聯(lián)液，用洗滌液洗5次。
6．每孔加人100ul TMB顯色液，室溫環(huán)境中孵育10min。
7．每孔加入100gl終止液，終止反應(yīng)，充分混勻。
8．用酶標(biāo)儀（波長為450nm）讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。
[注意事項]
1．整個檢測過程應(yīng)符合實驗室質(zhì)量手冊和生物安全守則規(guī)定，嚴(yán)防交叉污染。
2．所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
3．試劑應(yīng)保存于2～8℃冰箱，使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min。
4．洗滌時各孔均應(yīng)加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈，每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干。
5．血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存，2～8℃可保存7d，冷凍保存可至6個月，避免反復(fù)凍融。
6．試劑在儲存或使用過程中，禁止過熱、曝曬或強(qiáng)光。
[正常參考值] 抗—CMVAb-IgM陰性