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熒光分光光度計(jì)測量熒光強(qiáng)度為什么要設(shè)定兩個(gè)波長?

閱讀:12343      發(fā)布時(shí)間:2021-7-27
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   熒光分光光度計(jì)使用的時(shí)候存在兩種模式,一種是固定Ex掃Em,一種是固定Em掃Ex,將一個(gè)范圍的Ex(如230nm~300nm)的ex所對應(yīng)的Em組合起來就是3D熒光。簡單的說,Ex是激發(fā),也就是手電筒(光源),固定Ex的意思就是只用某個(gè)波長,如254nm作為光源來激發(fā)樣品,觀察的是固定該光源時(shí),樣品在不同波長位置所展現(xiàn)的熒光強(qiáng)度(即em),簡單的說,就是看光屏上的強(qiáng)度。這一模式是為了了解待測物在哪個(gè)波段有光致發(fā)光現(xiàn)象。而Em,也就是被激發(fā)的光(就是接收器上接收到的),這是在知道了我的樣品在哪一個(gè)位置發(fā)光(被激發(fā)后發(fā)光)后,或者說,選定一個(gè)我需要的發(fā)光位置后,看看哪一個(gè)波長的光源對樣品激發(fā)效果更好。
 
  一個(gè)是激發(fā)波長,另一個(gè)是發(fā)射波長。你得到一個(gè)新的樣品,你不知道它的激發(fā)波長,發(fā)射波長,那么辦呢。在前輩總結(jié)下,熒光分光光度計(jì)發(fā)現(xiàn)樣品的發(fā)射波長波動小,所以先確定發(fā)射波長。沒有激發(fā)波長激發(fā),發(fā)射波長也得不到。一般熒光樣品的激發(fā)波長在300-410nm之間,你們可以查看同類物質(zhì)的激發(fā)波長是多少,總結(jié)一下,在300—410nm中,先確定一個(gè)激發(fā)波長。在激發(fā)波長的激發(fā)下,出現(xiàn)熒光強(qiáng)度變化圖譜,熒光強(qiáng)度最大的那個(gè)點(diǎn)所對應(yīng)的發(fā)射波長,即圖的橫坐標(biāo)上的值,為發(fā)射波長。以發(fā)射波長確定最佳激發(fā)波長原則,熒光分光光度計(jì)以上面的發(fā)射波長為激發(fā)波長,再次得到一個(gè)光譜圖。在光譜圖中,同樣有一個(gè)最大熒光強(qiáng)度,這個(gè)強(qiáng)度所對應(yīng)的發(fā)射波長就是你要找的最佳激發(fā)波長。所以會有兩條圖線,就有兩個(gè)波長。

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