蛋白質(zhì)含量的定量測定——雙縮脲法（Biuret法）

實驗原理

具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應(yīng)。在堿性溶液中雙縮脲與銅離子結(jié)合形成復(fù)雜的紫好色復(fù)合物。而蛋白質(zhì)及多肽的肽鍵與雙縮脲的結(jié)構(gòu)類似，也能與Cu2+形成紫紅色絡(luò)合物，其zui大光吸收在540nm處。其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸的組成無關(guān)，該法測定蛋白質(zhì)的濃度范圍適于1~10mg /mL。雙縮脲法常用于蛋白質(zhì)的快速測定。

紫紅色銅雙縮脲復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)為：

試劑和器材

 一、試劑

雙縮脲試劑：取1.5g硫酸銅（CuSO4?5H2O）和6.0g的酒石酸鉀鈉（NaKC4H4O6 · 4H2O）溶于500mL蒸餾水中，在攪拌下加入300mL 10%NaOH溶液，用水稀釋至1000mL。此試劑可長期保存、備用。

 二、標(biāo)準(zhǔn)和待測蛋白質(zhì)溶液

標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液

10mg/mL結(jié)晶牛血清白蛋白溶液或相同濃度的酪蛋白溶液（用0.05mol/L氫氧化鈉溶液配制）。作為標(biāo)準(zhǔn)用的蛋白質(zhì)要預(yù)先用微量克氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量，根據(jù)其純度稱量，配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。

待測蛋白質(zhì)溶液

人血清（稀釋10倍）。測試其他蛋白質(zhì)樣品應(yīng)稀釋適當(dāng)倍數(shù)，使其濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線測試范圍內(nèi)。