植物核糖體分離試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

植物核糖體分離試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

植物核糖體分離試劑是一種旨在通過(guò)物理破壁和化學(xué)破膜以及等密度超速離心處理方法，從植物組織中分離出完整而純化的80S核糖體組分的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于各種新鮮或凍存的植物葉片（leaf）、谷粒（grain）、種子（seed）等組織胞漿核糖體成分的分離。產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定，無(wú)核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產(chǎn)量皆高。 

技術(shù)背景

核糖體（ribosome）是一種細(xì)小顆粒的核糖蛋白復(fù)合物（ribonucleoprotein complex），生命細(xì)胞制造蛋白質(zhì)的非膜性結(jié)構(gòu)元素和轉(zhuǎn)譯裝置（translational apparatus），由RNA和蛋白質(zhì)組成，具有多肽轉(zhuǎn)移酶的活性。其分成2個(gè)亞體：大亞體和小亞體。核糖體通過(guò)大亞體結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)核糖體（tRNA），而小亞體結(jié)合信使RNA（mRNA），然后閱讀RNA提供的信息，轉(zhuǎn)譯（translation）成氨基酸，連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞漿（游離核糖體）、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體，由40S小亞體和60S大亞體組成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個(gè)蛋白組成；而40S由18S RNA和33個(gè)蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似，為70S核糖體，由30S小亞體和50S大亞體組成：50S包括5S、23S RNA和34個(gè)蛋白；30S包括16S RNA和21個(gè)蛋白。   

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）                                   毫升
裂解液（Reagent B）                                   毫升
分離液（Reagent C）                                   毫升
保存液（Reagent D）                                   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                                               1份
                                                 
保存方式

保存裂解液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器
尼龍絲或60微米尼龍網(wǎng)：用于去除植物裂解殘?jiān)?br />小型漏斗：用于過(guò)濾的裝置
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
超速離心機(jī)：用于樣品操作
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細(xì)胞
渦旋震蕩儀：用于混勻

實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進(jìn)行下列操作。

1．準(zhǔn)備好新鮮或凍存的植物組織（葉片、種子、根尖等），并秤重以確定1至2克組織重量 
2．（選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管
3．（選擇步驟）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4．移入一個(gè)液氮凍存管
5．即刻放進(jìn)液氮罐放置一夜
6．次日從液氮罐里取出，即刻（zui快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
7．放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
8．加入預(yù)冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
9．渦旋震蕩5秒，充分混勻
10．即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
11．置于冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）（注意：未見(jiàn)組織塊）
12．準(zhǔn)備1個(gè)小型漏斗，內(nèi)襯尼龍絲或60微米尼龍網(wǎng)，置于50毫升錐形離心管上
13．將所有組織勻漿液移入到小型漏斗里過(guò)濾（注意：可以使用4層紗布替代）
14．放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為1500g
15．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管 
16．放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為10000g
17．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管 
18．（選擇步驟）放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心30分鐘，速度為30000g
19．（選擇步驟）小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管
20．放進(jìn)－70℃冰箱里備用或放進(jìn)冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
21．移取xx毫升分離液（Reagent C）到8毫升超速離心管 
22．小心沿著管壁，在分離液（Reagent C）上面，一滴一滴加入5毫升上述獲得的核糖體組分 （注意：避免晃動(dòng)，同時(shí)離心前，使用礦物油填滿離心管）
23．小心放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心16小時(shí)，速度為180000g
24．小心取出離心管 
25．小心抽去上清液
26．加入xx毫升保存液（Reagent D），混勻顆粒群
27．放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為20000g
28．小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
29．（選擇步驟）進(jìn)行核糖體定量測(cè)定 
30．放進(jìn)－70℃冰箱里保存或置于冰槽里準(zhǔn)備后續(xù)操作

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品為10次操作（1至2克植物組織/次） 
2．建議使用新鮮植物樣品為佳
3．植物樣品務(wù)必避光，以防止淀粉聚集
4．樣品操作均須在4℃或以下?tīng)顟B(tài)下進(jìn)行
5．操作時(shí)，須無(wú)菌操作，避免污染母液，尤其是分離液（Reagent C） 
6．建議使用足夠的組織量
7．核糖體定量計(jì)算公式（微克/微升）： A260  11.1
8．如果進(jìn)行核糖體蛋白萃取，建議使用純化核糖體蛋白質(zhì)萃取試劑盒—16041
9．本公司提供系列植物核糖體分析技術(shù)產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的核糖體維持正常活性
3．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承諾

用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷(xiāo)售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)立即以書(shū)面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

訂購(gòu)信息

單組份訂購(gòu)信息

編號(hào)                    名稱(chēng)                                            規(guī)格        
16040.1                植物核糖體分離試劑盒                    10次
16040.1A            清理液（Reagent A）                        毫升
16040.1B            裂解液（Reagent B）                        毫升
16040.1C            分離液（Reagent C）                        毫升
16040.1D             保存液（Reagent D）                        毫升
 
試劑盒訂購(gòu)信息 

產(chǎn)品編號(hào)    名稱(chēng)    規(guī)格
16040.1    植物核糖體分離試劑盒    10次
16040.2    植物葉綠體核糖體分離試劑盒    10次
16040.3    植物線粒體核糖體分離試劑盒    10次
16041    純化核糖體蛋白質(zhì)萃取試劑盒    20次