核酸電泳是進(jìn)行核算研究的重要手段，常用于和瓊脂糖凝膠聚丙烯酰胺凝膠兩種，凝膠電泳操作簡(jiǎn)單，是分離鑒定和純化核算的一種常用方法，那么核酸電泳的步驟有哪些的呢？

瓊脂糖凝膠電泳的步驟：

用透明膠將玻璃板或電泳裝置所配備的塑料盤(pán)的邊緣圈封，制成膠模，置水平工作臺(tái)上；

(2) 稱(chēng)取適量瓊脂糖，置電泳緩沖液中，加熱使瓊脂糖溶解；

(3) 待溶液冷60℃，加入10mg/ml EB貯存液，使終濃度達(dá)0.5mg/ml；

(4) 在距離膠模底板0.5-1mm處放置電泳梳，將瓊脂糖溶液倒入膠模中，厚度約3-5mm，注意避免產(chǎn)生氣泡；

(5) 凝膠*凝固后，移去梳子和透明膠，將凝膠放入電泳槽。加入TBE緩沖液使恰好沒(méi)過(guò)膠面約1mm；

(6) 將DNA樣品與1/6體積加樣緩沖液混合后，加入樣品槽中；

(7) 接通電源，使樣品槽在負(fù)，用1-5v/cm的電壓，電泳適當(dāng)時(shí)間；

(8) 電泳結(jié)束后，可將含EB的凝膠直接放在紫外線(xiàn)檢測(cè)儀上觀(guān)察，并拍照記錄，也可將不含EB的凝膠在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分鐘，再如上觀(guān)察和拍照，記錄結(jié)果。

聚丙烯酰胺凝膠電泳的步驟:

(1) 配制試劑

① 30%丙烯酰胺：100ml雙蒸水中含29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺。

② 5×TBE　每升溶液含54g Tris.HCl，27.5g硼酸和20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)。

③ 10%過(guò)硫酸銨：10ml雙蒸水中含1g過(guò)硫酸銨。

(2) 裝置膠模　將玻璃板和墊條事先用去污劑刷洗，并經(jīng)自來(lái)水和無(wú)離子水沖洗干凈，晾干。裝置時(shí)，將較大的玻璃板平放在工作臺(tái)上，將兩個(gè)墊條放在玻璃板兩側(cè)，涂上少量凡士林，并將上層玻璃板置于墊條上，用夾子將玻板連同墊條夾緊，底部用1%瓊脂糖密封。為防止漏膠，除放梳子一邊外，其余三邊應(yīng)用防水膠帶密封。

(3) 根據(jù)玻璃板大小及夾層厚薄計(jì)算所需凝膠溶液量，按表配制溶液(100ml)。

將35μl TEMED加入100ml混合液中，混勻，然后均勻連續(xù)注入兩玻璃板空隙中。

(4) 立即插入電泳梳，勿使梳齒下形成氣泡。

(5) 室溫聚合1小時(shí)，梳齒下出現(xiàn)折光帶時(shí)，表明聚合反應(yīng)已經(jīng)完成。若凝膠不立即使用，可用紗布或?yàn)V紙(用1×TBE浸泡)包蓋于凝膠頂部，置4℃保存1-2天。

(6) 拔去梳子，立即用水沖洗加樣孔。

(7) 除去底部膠帶，將凝膠直立放入電泳槽。在上下兩槽中灌好1×TBE溶液，驅(qū)盡凝膠底部附著的氣泡。并用1×TBE溶液沖洗加樣孔；

(8) 將核酸樣品與適量6×凝膠加樣緩沖液(見(jiàn)表2-28)混合，并加入凝膠加樣孔中；

(9) 接通電源，正極與下槽連接。電壓一般控制在1.8v/cm。電壓過(guò)高時(shí)凝膠產(chǎn)生的熱量可造成DNA區(qū)帶彎曲，甚引起小DNA片段的解鏈；

(10) 電泳畢，取下玻板和凝膠，放在工作臺(tái)上，從夾層一角輕撬，將上面的玻板輕輕移開(kāi)，并小心揭下凝膠，置染色液中染色并進(jìn)行結(jié)果觀(guān)察。