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大鼠催乳素ELISA KIT操作程序

閱讀:1365      發(fā)布時間:2011-5-27
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大鼠催乳素ELISA KIT性能:

1. 靈敏度:小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

大鼠催乳素ELISA KIT試劑的準備:

1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
500pg/ml (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250pg/ml (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
125pg/ml (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
62.5pg/ml (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
31.2pg/ml (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
15.6pg/ml (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0pg/ml (空白對照) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

大鼠催乳素ELISA KIT操作步驟:

1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5.每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

大鼠催乳素ELISA KIT計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
 

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