大家好，小編又又又來(lái)了。今天是WB最后一步了，抗體孵育到顯影過(guò)程。
01
一抗孵育
◆ 封閉結(jié)束前20min準(zhǔn)備和所需一抗數(shù)量相等的孵育盒，在孵育盒上用記號(hào)筆標(biāo)注出抗體編號(hào)及所需稀釋比。按照規(guī)定的稀釋比例進(jìn)行抗體稀釋。稀釋比例建議預(yù)實(shí)驗(yàn)提前摸索或者根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)上建議。
◆ 封閉時(shí)間結(jié)束之后，倒掉封閉液，將稀釋好的抗體加入到槽內(nèi)，將搖床放入4℃展示柜孵育過(guò)夜。
◆ 第二天將搖床搬出，平衡室溫?fù)u15min，倒掉一抗工作液，加入5mL TBST潤(rùn)洗膜一次，倒掉，加新的TBST洗膜5min，倒掉TBST，重復(fù)5次，此過(guò)程在搖床上進(jìn)行。
02
二抗孵育
◆ 在洗膜的過(guò)程中稀釋二抗，確定好一抗的物種來(lái)源，選擇相應(yīng)的二抗進(jìn)行稀釋，稀釋液為1xTBST。
◆ 洗膜結(jié)束，倒掉TBST，盡量使孵育盒內(nèi)無(wú)殘留液體。然后加入二抗稀釋液，孵育60min，此過(guò)程在搖床上進(jìn)行。
◆ 二抗孵育60min后，加入5mL TBST洗膜，“SPEED”檔位調(diào)到50-60，洗膜5min，倒掉TBST，重復(fù)5次。
03
顯影
按照膜的大小，配置ECL發(fā)光液體積，將發(fā)光液放在PE手套上，充分混勻。將膜從孵育盒中夾出，用紙沾干，放入發(fā)光液中5秒后用紙沾干，放入成像儀中曝光成像。
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產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
P0012 | 10×麗春紅 |
SW3010 | 膜封閉液 |
A1800 | 抗體稀釋液 |
A1810 | 一抗稀釋液 |
A1820 | HRP標(biāo)記抗體稀釋液 |
A1830 | AP標(biāo)記抗體稀釋液 |
A1840 | 熒光抗體稀釋液 |
T1085 | 1×TBST |
SW2010 | Western blotting (小鼠IgG)ECL顯色試劑盒 |
SW2020 | Western blotting (兔IgG)ECL顯色試劑盒 |
SW2030 | Western blotting (山羊IgG)ECL顯色試劑盒 |
SW2040 | Western blotting (小鼠/兔IgG) ECL顯色試劑盒 |
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