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在使用熒光蛋白上樣緩沖液需要關(guān)注哪些細節(jié)?

閱讀:1147      發(fā)布時間:2021-8-24
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  熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對SDS-PAGE的蛋白樣品進行預(yù)染,標(biāo)記上熒光。實驗完成以后,凝膠中或轉(zhuǎn)膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進行觀察和分析,無需染色脫色。熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強,背景低??蓪λ械鞍走M行染色,不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中,游離的染料分子與溴酚藍的遷移速率致,跑膠結(jié)束時移至凝膠末端,背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達純化以及Western blot的SDS-PAGE。

  熒光蛋白上樣緩沖液在進行蛋白樣品變性處理的同時對蛋白進行預(yù)染色,電泳結(jié)束后即可直接使用凝膠成像儀的紫外光源或者LED燈觀察電泳結(jié)果。免去了染色法染色脫色的過程,不增加任何其它操作步驟,不使用任何有機溶劑,保護環(huán)境,實驗室再無藍色污漬,電泳結(jié)束即可觀察實驗結(jié)果,節(jié)省了實驗時間。

  熒光蛋白上樣緩沖液在使用時應(yīng)注意以下幾點:

  1. 請勿使用該上樣緩沖液處理預(yù)染的或預(yù)處理的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)。這些產(chǎn)品與不兼容。
  2. 靈敏度影響因素:高pH(大于7)不會影響染色,低pH則會降低染色的效率,如果樣品的pH低于5,建議將pH調(diào)整7以上。
  3. 不適合在如下SDS-PAGE實驗中使用:切割蛋白條帶用以測序、質(zhì)譜分析或抗體制備。

  4. 建議-20℃避光保存,如果室溫放置2-3周,則可添加新的DTT,蛋白條帶會重新變得清晰和明亮。添加DTT的終濃度不要超過20 mM。也可以添加其他還原劑TCEP,效果也很好。

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