細胞來源是關鍵
支原體污染的常見原因之一是引入的培養(yǎng)物已經被感染。一旦進入實驗室,這些小東西會蔓延到每個角落,讓你崩潰。要避免這種情況,簡單的辦法就是不從其他實驗室要細胞,而從供應商或菌種保藏中心(ATCC或ECACC)購買,這些細胞經過嚴格檢測,確保不含有支原體。
如果購買有難度,或基于其他原因,不得不使用其他實驗室的細胞,那么也要保持警惕,在單獨的培養(yǎng)箱中隔離,同時進行支原體的檢測。市場上有多家公司提供支原體檢測試劑盒,你可自行選擇。
定期檢測很重要
即使實驗室沒有新來的細胞,支原體也可能通過操作人員傳遞到現(xiàn)有的培養(yǎng)物。當然,操作人員并不知道。支原體污染的另一條路線是通過你的細胞培養(yǎng)試劑。培養(yǎng)基、酶這些常用試劑,也有可能被支原體污染。
盡管無法*避免人或試劑的污染,但常規(guī)檢測也能避免情況惡化。也許,當支原體初次感染時,我們未必能檢測到,但盡早發(fā)現(xiàn),就能防止這種微生物的傳播,避免大的損失。
支原體檢測有很多種。直接培養(yǎng)方法雖然準確率高,但需要三到四周的時間。因此,我們在常規(guī)檢測中使用間接檢測方法已足夠,若發(fā)現(xiàn)陽性,則后續(xù)可采用較為繁瑣的直接檢測。常見的間接檢測方法有基于酶活性的熒光和生化分析、PCR分析、免疫分析等。
無菌操作要做好
支原體污染的另一個主要源頭是無菌操作不佳。盡管良好的操作可能是簡單的預防措施,但說起來容易,做起來難。每個人都會犯錯,特別是在重復勞動時。因此,實驗室應不定期開展培訓和監(jiān)督,以便讓每個人都充分認識到支原體的破壞性。
許多實驗室目前仍使用抗生素,但細胞培養(yǎng)人員逐漸認識到這是不負責任的,因為它帶來了耐藥微生物的問題。相反,好依賴自身的無菌操作來預防支原體,而只有在懷疑或確認感染的時候才使用抗生素。
保藏細胞防萬一
后,通過低溫保藏儲備一些細胞,以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象,或常規(guī)檢測呈陽性結果,那么可靠的補救措施是扔掉所有培養(yǎng)物,清潔培養(yǎng)箱和超凈臺,一切從頭開始。當然,你得確保儲備的細胞是不含支原體的.
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