蛋白marker的作用是什么,先要要了解一下什么是蛋白marker。在Western Blot過程中,分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細(xì)節(jié),然而就是這樣一個小細(xì)節(jié)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用。
蛋白marker的作用:
Marker是表面覆蓋有特殊反光材料的標(biāo)記物,常見形狀有球形、半球形。染色體上一個可以被識別的區(qū)域(比如限制性內(nèi)切酶的酶切點(diǎn),基因的位置等)。標(biāo)記的遺傳能夠被檢測出來。標(biāo)記可以是染色體上有表達(dá)功能的部分(比如基因),也可以是沒有編碼蛋白質(zhì)功能但遺傳特性能夠被檢測出來的部分。其次,蛋白marker可分為未預(yù)染的Marker即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及預(yù)染的Marker即單色預(yù)染和多色預(yù)染。
預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)
預(yù)染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物,通過與染料共價耦聯(lián),在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn),這種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以幫助我們在電泳時、電泳后,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計(jì)遷移率。值得注意的是預(yù)染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,可能導(dǎo)致一些偏差,所以不太適合定位蛋白——不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白*一樣,我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小,后都需要Western來定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,預(yù)染Marker還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用。
蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以分成未染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)、預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)二個。蛋白標(biāo)準(zhǔn)還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用,所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實(shí)驗(yàn)成功的必要條件之一。以上就是今天要介紹的蛋白marker的作用。
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