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RNA 病毒基因組提取試劑盒
貨號:R2000
規(guī)格:50T/100T
產品內容:
試劑盒組成 | R2000-50 | R2000-100 |
蛋白酶 K | 1ml | 2ml |
洗柱液 | 50ml | 50ml×2 |
結合液 | 25ml | 50ml |
漂洗液 | 15ml | 30ml |
RNase free ddH2O | 15ml | 15ml×2 |
RNase free 吸附柱 | 50 個 | 100 個 |
RNase free 收集管(2ml) | 50 個 | 100 個 |
保存:室溫(15℃-25℃)干燥條件下可保存 12 個月,更長時間的保存可置于 2℃-8℃。
產品簡介:
本試劑盒適合于從血清、細胞上清、淋巴液中提取 RNA 病毒基因組,不適合于細胞等組織內 RNA 病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組 RNA 可用于 RT-PCR 實驗。
操作步驟:
使用前請先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無水乙醇,加入到離瓶口約 0.5-1cm 距離,蓋好搖勻。所有離心步驟均在 2-8℃條件下進行。
1、 取病毒上清液 0.5ml,12000rpm 離心 5min,盡量吸盡上清使用,棄去沉淀(如無沉淀可省去此步) 。
2、 向病毒上清中加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K,充分混勻,65℃消化 10min,期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。
3、 吸附柱前處理: 從包裝中取出吸附柱, 放入收集管中, 加入 700ul 洗柱液, 室溫放置 2 分鐘, 2-8℃ 12000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中待用。
4、 向病毒上清中加入 500ul 結合液,充分混勻。再向管中加入 400ul 無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響 RNA 的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,靜置 2min。 (吸附柱的大容積為 750ul,可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。 )
5、 12000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
6、 向吸附柱中加入 700ul 漂洗液( 使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7、 向吸附柱中加入 500ul 漂洗液,12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、 12000rpm 離心 2min,將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR 等。
10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50ul-100ul 經(jīng) 65℃水浴預熱的 RNase freeddH2O,室溫放置 5min,12000rpm 離心 2min。即可得到高質量的病毒基因組 RNA。
注意事項:
1、經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌,可能導致 RNase 污染。使用無 RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
2、樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的 RNA 提取量也下降。
3、若結合液中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解。
4、如果樣品消化不*,后面的離心步驟中可能會出現(xiàn)堵柱子的情況,可適當延長離心時間。
5、洗脫緩沖液的體積好不少于 50ul,體積過小會影響回收效率。
6、RNA 產物應保存在-70℃,以防 RNA 降解。
7、RNA 檢測:得到的基因組 RNA 片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關。由于病毒不含有核糖體RNA, 所以常規(guī)電泳無法檢測, 只有后期實驗才可檢測到。 D260值為1相當于大約40 μg/ml單鏈RNA。
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2、低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
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