植物花色苷含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC1380
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

產(chǎn)品說明：
花色苷是一類可食用的易溶于水等溶劑的天然色素?；ㄉ帐怪参锍尸F(xiàn)多彩的顏色，本身更具有多種保健作用，因而在天然食用色素、保健品和醫(yī)藥行業(yè)都有著廣闊的應(yīng)用前景。


根據(jù)花色苷在不同pH下的結(jié)構(gòu)性質(zhì)測定花色苷含量，在pH為1時(shí)花色苷在530nm處有最大吸收峰,而當(dāng)pH為4.5時(shí)，花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色查爾酮形式在530nm處無吸收峰，通過測定不同pH下的530nm和700nm處的吸光度值計(jì)算樣本中花色苷的含量。
 注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
按照樣本質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10的比例（建議稱取約 0.1g樣本，加入1mL提取液），充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中， 封口膜封口防止揮發(fā)，60℃浸提30min，期間可震蕩數(shù)次，提取后提取液定容至1mL。12000rpm，常溫離心10min，取上清液待測。
二、測定步驟

1. 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，蒸餾水調(diào)零。

2. 加樣表：

充分混勻后測定測定管1和測定管2分別在530nm和700nm處的吸光度，測定管1在530nm和700nm處的吸光值記為A1、A1’，測定管2在530nm和700nm處的吸光值記為A2、A2’，計(jì)算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。

三、花色苷含量計(jì)算

1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

花色苷含量（μmol/g 質(zhì)量）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷(Cpr ×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr
F：稀釋倍數(shù)，該反應(yīng)體系下為10；d：比色皿光徑，1cm；W：樣本質(zhì)量，g；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù)，2.69×10⁴mL/mmol/cm；V提?。禾崛∫嚎傮w積，1mL；10³：單位換算系數(shù)，1mmol=10³μmol；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL（蛋白濃度需用PBS單獨(dú)提取后自行測定）。
注意事項(xiàng)：

1. 如果A1大于1，可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，保證總體積1mL不變，如50μL上清液和950μL試劑一（相當(dāng)于稀釋20倍）；如果A1小于0.1，可以適當(dāng)縮小稀釋倍數(shù)，保證總體積不變，如500μL上清液和500μL試劑一（相當(dāng)于稀釋 2 倍），使A1保持在0.1~1范圍內(nèi)，可提高檢測靈敏度；注意應(yīng)同樣調(diào)整上清液和試劑二體積比例；計(jì)算時(shí)以實(shí)際稀釋倍數(shù)代入計(jì)算公式中。

2. 因提取液會使蛋白變性，若使用蛋白濃度計(jì)算需用PBS單獨(dú)提取后自行測定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g西梅皮加入1mL提取液充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中，封口膜封口防止揮發(fā)，60℃浸提30min，期間可震蕩數(shù)次，提取后提取液定容至1mL，離心取上清后按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）=（0.249-0.101）-（0.133-0.065）=0.08，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：花色苷含量（μmol/g質(zhì)量）=0.037×ΔA× F÷W =0.037×0.08×10÷0.1=0.296 μmol/g 質(zhì)量。

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